溶剂诱导相变萃取法用于高效液相色谱-质谱分析的血浆样品前处理.pdfVIP

V01．31 高等 学校 化 学 学报 No．8 2010年8月 CHEMICALJOURNALOFCHINESEUNIVERSITIES 15l7～152l 溶剂诱导相变萃取法用于高效液相色谱一质谱 分析的血浆样 品前处理 张鸣珊 ，刘国柱，李圣军，陈 波，姚守拙 (湖南师范大学化学生物学及中药分析省部共建教育部重点实验室，长沙410081) 摘要 在匀相的乙腈一水体系中添加一种疏水但与乙腈互溶的有机溶剂 (如氯仿)，能诱导乙腈一水体系分相， 基于此现象建立了一种血浆样品处理方法——溶剂诱导相变萃取 (SIPTE)．与传统的液一液萃取法相比，该 法最大的优势为新形成的有机相为乙腈 (仅含少量氯仿)，与常用的反相c柱兼容，能直接进行高效液相色 谱一质谱分析．此外，通过减少乙腈及氯仿的用量还可实现样品的自动浓缩．本文通过测定血浆中尼群地平 ， 验证了该方法的有效性．使用反相c柱，以 (乙腈)：(水)=70：30(含20mmoL／L甲酸铵)为流动相，尼莫 地平为内标 ，ESI正离子模式下选择离子监测 (SIM)测定了血浆中尼群地平的浓度．实验所得的线性、精密 度和准确度结果良好，表明所建立的方法灵敏、准确、简单、快速，可用于药物代谢动力学研究． 关键词 溶剂诱导相变萃取；高效液相色谱一质谱；尼群地平；尼莫地平 中图分类号 0652．62；0657．7 文献标识码 A 文章编号 0251-0790(2010)08—1517-05 药物代谢动力学研究生物体 内药物的吸收、分布、代谢和排泄¨J，对制药工业中新药的开发和发 展十分重要．对包括血浆在内的生物样品中的药物定量定性测定是药物代谢动力学研究的重要内容， 因此快速、灵敏、准确地测定血浆中的目标药物非常重要．血浆内包含高浓度的蛋 白、小分子化合物 和无机盐，成分极其复杂．目前常用的血浆样品处理方法包括液一液萃取法、直接沉淀蛋 白法及固相微 萃取 (SPE)法 ．对于传统的液一液萃取法，提取溶剂为疏水性有机溶剂，与反相高效液相色谱 (HPLC)的流动相不兼容，不能直接进样 ，需N 气吹干后再溶解 ，因此步骤繁琐，耗时长，有机溶剂浪 费大；直接沉淀蛋白法只是将蛋 白质沉淀，且常常沉淀不完全，并未实现对分析物的纯化和富集，基 质背景复杂，因而对低含量物质的测定存在局限性，且很容易造成色谱柱的污染及堵塞；SPE价格昂 贵，需经过活化、平衡、上样、冲洗及洗脱等多个步骤，耗时长且操作繁琐，另外还容易造成SPE柱的 堵塞．可见，一个理想的样品处理方法应该是能够有效地消除干扰、自动富集 目标物且简单经济． 实验中发现，在匀相的乙腈．水体系中添加一种疏水且与乙腈互溶的有机溶剂 (如氯仿)能诱导乙 腈一水体系分相．基于此，本组曾建立了一种新的血浆样品处理方法，称为溶剂诱导相变萃取 (SII：rIE) 法 J．即先将血浆与乙腈混合，然后添加少量氯仿等疏水性有机溶剂诱导整个体系分相．该方法与传 统的液一液萃取法相比最大优势为新形成的有机相为乙腈(仅含少量氯仿)，其与常用的反相 HPLC流 动相兼容，能直接进行HPLC—MS分析．此外，通过减少乙腈及氯仿的用量能实现样品的自动浓缩．我 们已成功地利用该方法测定了血浆中穿心莲 内酯、西地那非及非那雄胺的含量 ．本文将 SIPTE方法 用于血浆中降血压药物尼群地平的测定，进一步验证了该方法的有效性． 1 实验部分 1．1 仪器与试剂 TG16G台式高速离心机 (湖南凯达科学仪器有限公司)；Waters2695分离单元 (美 国Waters公 司)，包括四元低压梯度泵及 自动进样器；MicromassZQ2000质谱检测器(英 国)，包括电喷雾(ESI)电 收稿 Et期 ：2009．12-14． 基会项 目：国家 “九七三”计划项 目(批准号 ：2006CB504701)和国家 自然科学基金 (批准号20927005)资助 联系人简介 ：陈 波，男，博士，教授 ，博士生导师，主要从事 中药及色谱分析研究．E—mail：dr—chenpo@vip．sina．corn 高等 学校 化 学 学报