大肠癌中MAD2的表达及意义.pdfVIP

实用肿瘤杂 志20O9年 第 24卷 第 5期 · 437 · 大肠癌 中MAD2的表达及意义 李刚强 ，王春淑 ，朱 瑞 ，周海亚 ，侯 君。，谭 云山 (11．解放军 四五五医院病理科 ，上海 200052；2．复旦大学附属中山医院病理科 ．上海 200032) 摘 要 ：目的 了解大肠癌 中MAD2表达情况 ，探讨其在大肠癌、腺瘤及正常大肠黏膜组织 中的表达差异，分 析其 临床 意义 。方法 通过实时荧光定量PCR和免疫组化方法检测大肠癌、腺瘤及正常大肠黏膜组织中MAD2表 达 ，并对大肠癌组织 中MAD2扩增产物进行测序 。结果 免疫组化方法结果显示大肠癌组织 中MAD2的阳性表达 明显高于腺瘤和正常大肠黏膜组织 (66．7 w39．6 22．9 )，三者 比较差异有统计学意义 (Po．001)。MAD2 表达与肿瘤分化和无瘤生存时间有关 (PO．05)。实时荧光定量PCR提示肠癌组织中MAD2的表达量 明显高于正 常大肠黏膜组织，大肠癌组织 中未见MAD2基因突变 。结论 基 因MAD2表达异常是大肠癌产生的机制之一，与大 肠癌的发生 、发展有关 ，^ D2可能是大肠癌预后 的一项重要预测指标 。 关键词 ：大肠肿瘤 ／遗传学；基因，MAD2；突变 ；预后；聚合酶链反应；免疫组织化学 中图分类号 ：R735．3 Ll 文献标识码 ：A 文章编号 ：1001—1692(2009)050437—04 大肠癌是一种常见的消化道恶性肿瘤 ，其发生 品。MAD2抗体使用稀释度为1：5O。实时荧光定量 和发展是一个十分复杂的过程。最近研究发现，非整 PCR所用引物 和探针 由中山大学达安基因股份有 倍体是染色体不稳定性的表现形式 。染色体不稳定 限公司设计合成 。 性 与 纺 锤 体检 查 点 ，如 MAD2(mitoticarrest 1．3 实验方法 difficent)等 的表达异常有关 口]。本研究采用实时荧 1．3．1 MAD2DNA检测 取石蜡包埋 的癌组织和 光定量 PCR和 免疫 组化 方法 检测 大肠 癌组 织 中 正常黏膜组织 ，2O m厚度切片 ，脱蜡后蛋 白酶K消 MAD2的表达 ，探讨它 与大肠癌 发生、发展的关 系 化过夜。使用OMEGA试剂盒提取DNA。采用实时 及临床意义 。 荧光定量 PCR技术 (ABI7900real—timePCR)，对 照样本为人正常大肠黏膜组织 ，以GAPDH(3-磷酸 1 材料与方法 甘油醛脱氢酶)为内对照。基因的引物和探针序列见 1．1 材料 表 1及表 2，其 中探针于 5’端标记荧光发光基 团 收集解放军 四五五 医院病理科 2004年 1月一 FAM，3’端标记荧光淬灭基团TAMRA。PCR反应 2005年1月大肠癌手术切除组织48例 ，年龄36～7O 条件为：5OC 18O秒 ，95C 300秒 ，然后95C 15秒， 岁 ．中位年龄45岁 。其中结肠癌28例 ，直肠癌20例 ； 60C 45秒 ，40个循环 。MA 的表达量 一2一Act× 高分化腺癌 15例 ，中分化腺癌22例 ，低分化腺癌 11 1()0Voo，Act一 目标基因CT值一内参 (GAPDH)CT 例。同时收集48例大肠腺瘤及手术切缘大肠黏膜组 值 。 织作为对照。所有组织用4 甲醛固定 ，石蜡包埋。所 1．3．2 MAD2基因测序 提取备用的大肠癌组织 有大肠癌 患者均 通过 电话 随访 ，截 止 随访 日期 为 DNA，PCR扩增后采用PCR产物纯化试剂盒 (华舜 2008年 6月 。 生 物 有 限公 司)纯 化 ，利 用 AB