EUK4010对Presenilin-1／Presenilin-2双基因敲除小鼠神经退行性病变的影响.pdfVIP

第48卷 第 5期 复 旦 学 报 (自然科学版) Vo1．48No．5 2009年 10月 JournalofFudanUniversity(NaturalScience) oct．2009 文章编号：0427—7104(2009)05—0648—08 EUK4010对 Presenilin一1／Presenilin一2双基 因 敲除小鼠神经退行性病变的影响 陈逸群，姜 旭，张冬丽，王丽丽，梅 兵 (华东师范大学 脑功能基因组学研究所 ，上海 200062) 摘 要：为了研究本实验室筛选出的单体化合物 EUK4010对Presenilin-1／Presenilin-2双基因敲除小鼠神经退 行性症状的作用及机制 ，将 EUK4010(10Izg／g体重)分别作用于 2月龄和6月龄的双基因敲除小鼠(dKO小 鼠)，通过组织学、实时荧光定量 PCR及Westernblot、行为学等方法发现该化合物对 dKO小鼠的体重下降、脑 室扩大、海马萎缩等有一定缓解作用 ，但对 dKO小鼠认知行为的改变尚不明显．进一步分析发现，EUK401o对 dKO小鼠神经退行性症状的改善可能是抑制了由Presenilin-1／Presenilin-2双基因敲除导致的GFAP、Clqa与 C4等炎症反应相关基因在皮层与海马中的表达上调所致． 关键词：Presenilin；双基因敲除小鼠；神经退行性病变；EUK4010；炎症反应因子 中图分类号：R964 文献标志码 ：A 阿尔茨海默症(Alzheimer’Sdisease，AD)是最常见的中枢神经系统退行性疾病，虽然在 65岁以下人 群中的患病率低于 1 ，但随着年龄的增加，AD的发病率几乎呈指数增长，严重影响了老年人的健康和 生活品质[1]．大多数AD呈散发型，少数患者具有家族性(FamilialAlzheimer’Sdisease，FAD)，为常染色 体显性遗传．研究发现，分别位于 14号及 1号染色体上的Presenilin一1(PS1)及 Presenilin一2(PS2)基因的 突变是导致早发性 FAD最主要的原因_2。]．PS1与PS2基因具有约 67 的同源性，均是 7分泌酶的催化 组分，而 了分泌酶负责将淀粉样蛋 白前体蛋 白(Amyloidprecursorprotein，APP)水解成 I3淀粉样蛋 白 (Amyloidpeptide，AJ3)，因此 PSs的突变导致具细胞毒性的At? 增多，进而沉积在大脑皮层神经元外形 成老年斑并诱导神经退行性病变的发生_4]． 研究表明，敲除小鼠的PS1基因会导致胚胎死亡，敲除PS2的小鼠仅仅在肺部出现轻微的纤维化症 状[6]．而利用条件性敲除技术在前脑特异性敲除PS1基因则不影响小鼠的发育及生长，仅对认知功能有 一 些细微损伤[9。 ．但 Tsien等利用前脑特异性敲除PS1基因的小 鼠与PS2敲除小 鼠杂交产生的PSI／ PS2双基因敲除小鼠(dKO小 鼠)，则表现出一系列类似 AD 的神经退行性病症，包括 tau蛋 白高度磷酸 化、神经元凋亡、皮层萎缩、侧脑室和第三脑室扩大以及认知能力与记忆严重受损等~11-12]，因此 dKO小鼠 是研究神经退行性疾病发病机理及治疗方法较好的动物模型． 神经退行性疾病迄今尚无有效的治疗药物．本实验室从近 2000种中药提取物中筛选出的EUK4010 是一种天然的单体化合物，经细胞实验发现其对阻止神经元凋亡、下调 1t3基因表达有明显作用[1．本实 验则探讨该化合物对PS1／PS2双基因敲除小鼠神经退行性病症的影响及其可能的分子机制． 1 材料与方法 1．1 实验动物及分组 PSl／PS2双基因敲除小鼠(基因型为Cre+／一，PSIf／f，PS2一／～)由JoeZ．Tsien教授惠赠，其繁殖 和鉴定方法同文献-[11]；对照组选用的是遗传背景、年龄及性别比均相同的同窝小鼠(基因型为Cre一／一， 收稿 日期 ：2009—0224 基金项 目：上海市科学技术委员会 “登山行动计划”资助项 目(06DZ19003) 作者简介：陈逸群 (1985～)，女，硕士研究生；通讯联系人：梅 兵，女，副教授 ，Dmail：bmei@brai~ecnu．edu．en, 第