连翘提取物对脓毒血症小鼠及体内T淋巴细胞影响.pdf

《现代免疫学~2009年第 29卷第 5期 连翘提取物对脓毒血症小鼠及体 内T淋巴细胞影响 尹乐乐，曾耀英，侯会娜 (暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫研究中心，广州 510632) 摘要 ：探讨连翘提取物(Fs)对盲肠结扎穿孔(CLP)诱导脓毒血症小 鼠的影响以及 FS对 CIP诱导小 鼠脓毒血症体 内T淋 巴 细胞的影 响。建立脓毒血症动物模型 ，观察 7d内FS对小鼠存活率 的影 响；计算各组小鼠胸腺和脾脏指数 ；MTT 比色法 以及 CFDA—SE染色分析 ，流式细胞术(FCM)检测 FS对机体 T淋巴细胞增殖 的影响。FS可延长 CLP诱导脓毒血症小 鼠的 存活率 ；FS药物治疗组小 鼠脾脏的重量和指数 明显增加和小 鼠胸腺指数明显增加 ；药物 FS治疗组对脓毒血症早期炎症性 小鼠淋 巴结细胞的增殖有抑制作用。FS对 CIP小 鼠胸腺和脾脏有保护作用。对脓毒血症早期炎症引起 的T淋巴细胞增殖 有抑制作用。 关键词 ：连翘提取物 ；脓毒血症 ；T淋巴细胞 中图分类号 ：R392．12 文献标识码 ：A 文章编号 ：1O(]1—2478(2009)05—0392—05 脓毒血症是感染引起的全身炎症反应 ，多种致 8～10周龄，体质量 (20-+-2)g购 自广东省实验动 炎因子如肿瘤坏死 因子 (TNF)、 白细胞 介素 物中心。连翘提取物 (FSextract)购 自四川广汗市 (IL)、一氧化氮 (NO)等被激活，同时细胞凋亡也 维康植化有限公司 ，为木犀植物连翘的干燥果实提 明显增多。其中淋巴细胞 的凋亡尤为人们所关注。 取而成 。噻唑兰 (MTT)购 自美 国 Sigma公 司。 Hotchkiss等口研究认为脓毒血症存在原发性低免 ALT、AST试剂盒均购 自上海荣盛生物技术有限 疫反应，有 明显 的 T淋 巴细胞 免疫功能抑制现 公司。L_谷氨酰胺、 巯基 乙醇、刀豆蛋 白A (ConA) 象 ，其发生与免疫功能紊乱、大量淋巴细胞凋亡和 购 自Sigma公司。羧基荧光素乙酰乙酸 (carboxy- 免疫抑制状态密切相关。Heidecke等 证实腹膜 fluorescein diacetate succinim idylester， CFDA— 炎患者 T淋 巴细胞增殖和细胞 因子分泌功能均受 SE)购 自美 国 MolecularProbes公 司。RPMI 到明显抑制，而且其严重程度与死亡率密切相关。 1640、胎牛血清 (fetalbovineserum，FBS)为美国 已有研究证实 ，炎症因子共同参与了淋 巴细胞的凋 GibcoBRL公司产品。流式细胞仪 (FACSCalibur) 亡。由于淋巴细胞是人体细胞免疫 的重要组成部 为美国BectonDickinson公司产品。 分，其凋亡会对人体的免疫功能产生重要影响。 1．2 手术器材与药 品 眼科镊、眼科剪、培养 本实验室已在体外实验 已经证实，连翘对正常 皿 、手术刀、组织剪、持针器 、纱布、8／0缝合 小鼠T淋巴细胞体外增殖 、活化等具有免疫调节 线 、10 水合氯醛、碘酒、9 生理盐水和 75 酒 作用_3]，为了研究 FS是否有助于减轻脓毒血症的 精 。 症状，通过盲肠结扎穿孔术 (CLP)建立脓毒血症动 1．3 方法 物模型分析 FS对机体和T淋 巴细胞的影响，并探 1．3．1 动物分组及给药 清洁级 BALB／c近交系 讨FS在体 内模型可能的保护机制。 小鼠，雄性 ，8～ 10周龄，体质量 (20±2)g，随 1 材料与方法 机均分为4组 ，每组均为 10只。分组为 ：1．自然 对照组 (Nature)；2．伪手术组 (Sham)；3．