纳米重组tPA基因质粒构建及对狗机械瓣膜置换术后血栓形成的预防.pdf

第 19卷第 19期 中国现代医学杂志 VoL19No．11} 2009年 10月 ChinaJournalofModernMedicine 0ct．20o9 文章编号： 1005—8982(2o09)19—2919—05 · 论著 纳米重组tPA基因质粒构建及对狗机械 瓣膜置换术后血栓形成的预防术 姬尚义，季 军，杨晓涵，何 霞，王小雷，叶小青，郭建洲，令文萍，张艳辉 (广东省深圳市孙逸仙心血管医院，广东 深圳 518020) 摘要：目的 探讨应用纳米重组 tPA基 因质粒预防狗实验性机械瓣膜置换术后血栓形成。 方法 建立狗 心脏三尖瓣机械瓣膜置换术模型；构建重组tPA基因质粒，用壳聚糖为材料制备纳米微粒包裹基因质粒并制备 成转基 因药物。在心脏三尖瓣机械瓣膜置换术同时注射心肌 以转染心肌组织，观察动物存活时间及其抗凝效 果；用免疫组织化学技术观察心肌细胞tPA蛋白表达；检测凝血酶原时间、INR和纤溶降解产物D一二聚体含 量；动物死亡和观察期结束后取心脏观察血栓形成状况。 结果 成功建立狗心脏三尖瓣机械瓣膜置换术模 型；成功构建了纳米重组tPA基因质粒并成功转染心肌细胞；实验组动物健康存活均达到观察期 12周，而对照 组动物平均存活 (4O．33±9．67)d，实验组与对照组相 比存活时间显著延长(PO．01)；静脉血D一二聚体含量检 测显示，实验组于术后 1周增高并且持续增高至 12周，显著高于对照组 (P0．o1)；实验组和对照组观察各期 凝血酶原时间和国际标准化比值(INR)无显著变化(P0．05)；心脏解剖显示实验组动物瓣膜周围及心腔 内未 见血栓形成 ，而对照组动物可见血栓形成。 结论 构建的纳米重组 tPA基 因质粒可预防实验性机械瓣膜置换 术血栓形成 ，这为应用基因药物防治人类疾病提供实验基础 。 关键词 ： 纳米微粒；tpA；机械瓣膜置换术 ；血栓形成 中图分类号：R一332；R619．2 文献标识码 ：A StudyonconstructionofnanotPA plasmidtoprevent thrombosisaftermechanicalvalvereplacementindogs JIShangyi，JIJun，YANGXiaohan，HEXia，WANGXiaolei，YEXiaoqing， GUOJianzhou，LINGWenping，ZHANGYanhui (ShenzhenSunYat-senCardiovascularHospital,Shenzhen,Gongdong51802~P．R．China) Abstratc：【Objective】ToelucidatethetransfectionofnanotPAgeneplasmidtopreventthrombosisaftertri- cuspidmechanicalvMvereplacementindogs． M【ethods】Adogmodeloftricuspidmechanicalvalvereplacement wasconstructed．A consturcted chitosan nanotPA geneplasmidwasused totransfeethte dogeardiocytesatthe sametimeoftricuspidreplacement．Theeffectofhtisgeneonsurvivaltimeofdogs，anticoagulationresultprohtrom— bintime，I