大鼠脾树突细胞的研究—光镜和电镜观察.pdfVIP

维普资讯 第 21卷 第 2期 解 剖 学 报 Ol 21，NO 2 1990 年 4月 ACTA ANAT0M ICA SINICA ADr 19g0 大鼠脾树状突细胞的研究——光镜 和电镜观察 许嘉弟 杨 宁 张锦蕉 查宝兴 黄福林” 王书友 刘为绚 “’ (南京铁道医学院组织学胚胎学教研室，跗院血细胞室Ⅲ ，南京盘陵医院电镜室”，南京210009) 摘要 本研究采用 Kampcrdijk的方挂，稍加改良，分离了大鼠脾树状突细监，并对分 离 的 细胞进行了光镜和 电镜拴捷。『结果表明细胞 95 以上存活 在悬液中，细胞保持突起，且突起船 持续伸缩。细胞 PAS反应、Prussianblue反应 、AlP、PO、ATPase反应均呈阴性，AcP反应 或呈阴性，或在按凹陷处呈大圆点状反应，或在棱附近有数个小飘粒反应。细胞膜表面有许多 Ia 抗原，但映乏Fc受俸。细胞表面光滑，突超呈鳞茎状戚薄片状。桉形不规则。细胞质内细胞器稀 少 ，但可有中等量的线粒俸，棱糖俸和拖状结构。结果表盟，分离细胞的形态结构与Stelnman和 Kamperdijk描述的淋巴坩状突细胞娄同1分离方接切实可行。 关■调 树状突细胞 脾 细胞化学 电镜 大鼍 淋巴榭状突细胞是当今嘱 目的一种新发现的细胞。细胞表面有大量 白细胞共 同抗 原 和 Ia抗原，是混合淋巴细胞反应中强有力的刺激细胞 在移植物排斥反应 中，是组织不 相 容 性的主要激发细胞，又是T细胞对抗原刺激的增殖反应中必不可少的辅助细胞 l【，l。T一只有 与树状突细胞形成簇，相互作用后 ，才能产生 自细胞介素 2…。体外实验证明淋巴树状突细 胞还是人免疫缺陷病病毒的易感细胞 。奉文采用Kamperdijk的方法，藕加改良，分离了 大鼠牌树状突细胞，并对它进行了光镜和电镜现寨，为进一步研究其生物学特性和它在移 植、抗肿瘤等方面的作用提供形态学费科 。 材 料 和 方 法 一 ， 树状突细胞的分离 取 D大 鼠，雌雄不拘，体重为 130~150g。三氯 甲烷麻醉下无菌取牌 ，制成单个细胞 悬液，在Ficoll—Metrizoate上分离，琅{氐密度细胞经 ”Co1000rads照射后，置 5 C02 培养箱中(37oc)过夜，培养基为 85 RPMI一1640培养基和 15 小牛血清，内加 100~g／ml 青霉素和 100~g／ml链霉素。取未骷壁鲥赡置 Ficoll—Metrizoate上分离，Ii籍去高密度放射 敏癔细胞，取低密度细胞作 EA花环试验 ，最后获得的低密度非花环形成细胞即为富有树状 突细胞的组分 。 =，光麓 (一)相差显馓镜标本制备 新鲜悬液涂片或 0．125 戊=醛固定绗 2o分钟的悬液踌片 置 Leitz相差显微镜下观察 。 ‘雹寡 自鼎科学基盘和省科委费助项 目 维普资讯 解 剖 学 报 2l卷 (二)细胞化学染色：1．改良Gomori铅法显示酸性磷酸 酶 (AcP)；2．改 良Gomorl 钙钴法显示碱性磷酸酶 (AlP)；3．Gllck法显示三磷酸腺苷酶 (ATPase)j4．Washburn 联苯胺反应显示过氧化物酶 (PO)；．’PAS反应显示糖类，Prussianblue反应显示铁 。上 述 细胞化学染色都作相应的对照和阳性对照。 (三)免疫荧光显示 Ia抗原t取新鲜的耋曰肫悬液涂片和肉汤腹腔注射 1日后的大鼠腹腔 巨噬细胞涂片，置冷丙酮中固定 5分钟，pH7．4PBS遗洗 第一抗体用小鼠抗大鼠Ia单克隆 抗体 MRC OX4上清液，稀释度为 1：50，37~(2温盒 内孵育30分钟，PBS洗 ，第二抗 体 用 山羊抗小鼠荧光 IgG，稀释崖为