农业微生物实验手册.docx

农业微生物实验手册福建省农业科学院农业微生物研究中心农业微生物实验手册目 录植株青枯雷尔氏菌的分离5植株尖孢镰刀菌的分离6植株内生细菌的分离8植株内生真菌的分离9植株内生放线菌的分离10土壤细菌的分离11土壤真菌的分离12土壤放线菌的分离13土壤青枯雷尔氏菌的分离14青枯雷尔氏菌回接番茄组培苗的标准操作规程15尖孢镰刀菌对植株致病性检测（盆栽苗）17尖孢镰刀菌基因组DNA的制备方法18镰刀菌的ITS鉴定19尖孢镰刀菌特异性引物（FOF1/ FOR1）鉴定镰刀菌21镰刀菌特异性引物(Fu3/ Fu4)22青枯雷尔氏菌DNA的制备方法23青枯雷尔氏菌的ITS鉴定24青枯雷尔氏菌质粒DNA的制备26细菌的常用鉴定方法27青枯雷尔氏菌/镰刀菌的RAMES多态性分析29尖孢镰刀菌的营养体亲和群31细菌总体脂肪酸的提取及测定33尖孢/串珠镰刀菌脂肪酸脂纹图谱38土壤总体脂肪酸的提取及测定40绿色荧光蛋白基因标记青枯雷尔氏菌41GFP标记的青枯雷尔氏菌的鉴定及荧光检测43GFP标记的青枯雷尔氏菌的生长特性45绿色荧光蛋白标记的青枯雷尔氏菌在番茄植株内的激光共聚焦显微镜观察47青枯雷尔氏菌的透射电镜观察方法48绿色荧光蛋白基因标记芽孢杆菌49青枯雷尔氏菌群体感应信号的检测（琼脂条法）51青枯雷尔氏菌群体感应信号的检测（琼脂饼法）52青枯雷尔氏菌群体感应信号物质的初步提取分析53青枯雷尔氏菌胞外多糖（EPS）的提取54青枯雷尔氏菌不同酶活性的测定55桑树细菌性枯萎病新病原菌BOX-PCR多态性研究58桑树细菌性枯萎病新病原菌ERIC-PCR多态性研究59尖孢镰刀菌β-葡萄糖苷酶酶活测定方法的建立60尖孢镰刀菌同工酶电泳62尖孢镰刀菌生长过程酸碱度的测定63尖孢镰刀菌对生长环境酸碱度的调节作用64不同酸碱度条件下尖孢镰刀菌生长的多态性65青枯雷尔氏菌生理小种的鉴定66青枯雷尔氏菌弱化指数的建立67青枯雷尔氏菌Hrp基因的克隆68细菌抗生素敏感性检测69枯萎病拮抗菌的筛选方法70青枯病拮抗菌的筛选方法71零排放猪垫料总体脂肪酸提取方法72铜绿假单胞菌抗利福平（Rif）突变菌株的筛选及鉴定73苏云金芽孢杆菌LSZ9408发酵上清液含糖量变化74苏云金芽孢杆菌LSZ9408发酵上清液含氮量变化76肠毒性大肠杆菌K88的GFP遗传转化及鉴定78大肠杆菌K88-GFP感染小白鼠致病特性动力学模型82植株不同部位不同酶活性测定方法：POD酶活性及比活力测定85植株不同部位不同酶活性测定方法：多酚氧化酶活性及比活力测定86烤烟烟叶总酚物质含量的测定87芽孢杆菌的生理特性分析89芽孢杆菌生化指标鉴定90菌种甘油冷冻保存标准操作规程93安地发酵工艺操作规程94生防菌剂生产操作规程97第一章 农业微生物生物学实验方法 第二章 农业微生物生理学实验方法第三章 农业微生物生态学实验方法第四章 农业微生物病理学实验方法第五章 农业微生物分子生物学实验方法第六章 农业微生物培养与发酵实验方法第七章 农业微生物资源收集与保存实验方法一、微生物菌种的冷冻干燥和低温冷冻保藏技术规程1、引言 微生物菌种资源的长期有效保藏是微生物菌种资源有效实施共享的前提，采用操作性简便、保藏周期长、遗传变异率低是菌种资源保藏方法的首要选择。本规程规定了冷冻干燥和低温冷冻保藏技术的定义、原理、技术要求、方法与步骤。本规程适用于普通病毒、细菌、放线菌、酵母菌、丝状真菌及担子菌等微生物菌种的保藏。对于病原微生物及其他需要特殊操作技术的微生物的参见相应的技术规程。下列文件中的条款通过本规范的引用而成为本规范的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本规范，然而，鼓励根据本规范达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本规范。国务院令第424号《病原微生物实验室生物安全管理条例》。GB19489实验室生物安全通用要求。科技部自然科技资源平台联合管理办公室文件自然科技资源共性描述规范（试行）。下列术语和定义适用于本规范。冷冻干燥freeze-drying，将微生物冷冻，在减压下利用升华作用除去水分，使细胞的生理活动趋于停止，从而长期维持存活状态。液氮超低温保藏preservationinliquidnitrogen，液氮超低温保藏技术是将菌种保藏在-196℃的液态氮，或在-150℃的氮气中的长期保藏方法，它的原理是利用微生物在-130℃以下新陈代谢趋于停止而有效地保藏微生物。-80℃低温冷冻保藏preservationin-80℃，将菌种保藏在-80℃冰箱中以减缓细胞的生理活动进行冷冻的一种保藏方法。2、实验方法微生物菌种的冷冻干燥保藏技术规程好氧菌冷冻干燥管的制备安瓿管准备安瓿管材料以中性玻璃为宜。清洗安瓿管时，先用