一株聚β-羟基丁酸（PHB）产生菌的分离纯化及鉴定.pdfVIP

型代 大芽 得到 PHB 实 找化学合成塑料的替代品，即生物可降解塑料，如 的存在 。PHB是原核生物细胞 内的储能物质，在 ’ PHA、聚氨基酸以及蛛丝蛋 白等。微生物合成的 细胞 内呈颗粒状 ，分子量一般为 106左右，熔点为 PHA有均聚物 、共混物和无规则共聚物 ，其性能 180℃，具有高结晶性 、光学活性和压电性等性 可在塑料和橡胶间变化…。已鉴定的PHA约有 40 质。与常用的热塑性塑料比较 ，PHB有相对较高的 E模量I，1。PHB来源于生物体，具有生物可降解性， 最终能够被微生物分解利用 ，不会对环境造成污 染 ，是一种具有广阔应用前景的生物材料 ，但 由 于其菌的产量不高，生产菌在生长过程 中所消耗 的原料价格较高，造成生产成本高，限制了PHB 的广泛应用。所以寻找能够利用廉价碳源和培养 原料的微生物资源 ，进行菌种改 良，改善和优化 PHB积累条件，合理有效地控制微生物的生长速 率，进一步提高细胞中PHB积累量 ，降低生产成 本，是有效加快 PHB工业化生产和应用的关键。 笔者等试 图分离筛选 能够产生和积累PHB且 性能优 良的菌株 。 1 材料与方法 l-1 土样 采 白兰州 。 1．2 仪 器 紫外分光光度仪 UV2100，尤尼柯仪器有限公 司；洁净工作台，苏州安泰空气技术有限公司；电 子天平 ，梅特勒 一托利多仪器(上海 )有限公司 ； 恒温鼓风干燥箱 CMD一20X，上海琅开实验设备有 限公司；光照培养箱 LRH一250一G，广东省 医疗器 械厂；低速台式离心机TDZ5一Ws，长沙湘仪离心 机仪器有限公司；高速台式冷冻离心机TGL一16， 将初筛所得菌株进行摇瓶震荡培养后，离心 实 长沙湘仪离心机仪器有限公司 ；高温灭菌器 DSX一280B，上海中安医疗器械厂。 提主取测定比较后，选出8株积累PHB较誓高翥的菌’ 1．3 培养基 1．3．1 富集培养基(g／L)尿素5．0g，葡萄糖 1．0g， MgSO40．5g，K2HPO40．1g，pH值 7．0，121℃灭菌 20min。 表 1 筛选菌株的PHB积累量 1．3．2 分离培养基(g／L)牛肉膏0．5g，葡萄糖 0．2g， 琼脂 2．0g，pH值 7．0g，121℃灭菌 20rain。 1．3．3 平板培养基(g／L)蛋 白胨 5．0g，酵母膏 1．0g， 甘油 10．0g，琼脂2．0g，pH值 7．0，121℃灭菌20rain。 1_3．4 基础发酵培养基 (g／L)蛋 白胨 5．0g，酵母 膏 1．0g，甘油5．0g，葡萄糖 5．0g，pH值 7．0，121cIC 灭菌 20rain。 2．3 富集营养培养 1．4 方 法 采用富集培养，将平板琼脂培养基中的蛋 白 1．4．1 分离筛选方法 土样经粉碎后在富集培 胨 增加到 1％ ，酵母 膏增至 0．5％，甘油增 至 养基中培养，然后稀释涂平板 ，反复纯化 ，挑取单 1．5％，30℃摇床培养 18h，然后梯度稀释