MP-120工作站批量提取法医样本DNA.pdf

技术应用 生命科学仪器 2009第7卷 ／1月刊 MP一120T．作站批量提取法医样本DNA 马辉 2，张智俊z，罗淑萍 (1．新疆农业大学农学院，新疆 乌鲁木齐 830052； 2．浙江林学院浙江省现代森林培育技术重点实验室，浙江 临安 311300) 摘要 DNA分子标记是继形态标记、细胞学标记、生化标记之后发展起来的一种新的更为理想的遗传标记，其在中 药研究中发挥了重要作用。DNA分子标记包括以分子杂交(southern杂交)为基础的DNA分子标记技术、以PCR为基 础的DNA分子标记技术和以DNA序列为基础的分子标记技术。本文对DNA分子标记的分类、原理及其在中药研究 中的应用进行了综述。 关键词 分子标记；中药；原理 ；应用 分子标记或称遗传标记，本质上是指生物个体或居 DNA分子标记技术主要检测DNA分子由于缺 群间的基因组由于缺失、插人、易位、倒置、重排或 失、插人、易位、倒位、重排或存在长短与排列不一 长短与排列不一的重复序列等机制而产生的多态性 的重复序列等机制而产生的多态性的一种技术其以电 DNA片段，其具有快速准确、多态性高，不受材料 泳图谱的形式表现，根据其所采用的技术原理不同分为 多少、发育时期和环境条件的限制。目前分子标记技 三类。 术在中药的分类、进化、遗传多样性、品种鉴别、遗 2．1 基于电泳技术和southem分子杂交技术为核心 传图谱的构建等研究领域中获得了广泛的运用。本文 的DNA标记技术 综述了分子标记技术的分类、原理及其在中药研究中 2．1．1 RFLP分子标记 的应用。 2．1．1．1 RFLP的基本原理RFLP是由Botstein【1 首先提出，是最早发展的分子标记技术，它是以生 1DNA分子标记的类别 物基因组DNA序列变异为基础研究不同基因间差异的 根据 目的基因所在细胞器的不同可分为核DNA标 一 项新技术。其基本原理是：生物 由于长期进化的结 记、线粒体DNA(mtDNA)标记和叶绿体DNA(cpDNA) 果，在种属间甚至品种间同源DNA序列上限制性内切酶 标记。mtDNA标记主要用于动物的起源进化、亲缘 识别位点不同，使基因组DNA经限制性内切酶切割成 关系、遗传变异、物种鉴别等研究…；核DNA和cp 不同长度的限制性片段导致其在凝胶上泳动速率不同， DNA分子标记主要存在于高等植物中，尤其以核 用DNA探针进行southern杂交、放射 自显影后就可得 DNA分子标记的应用最多。 DNA限制性片段的多态性(rtFLP)。 DNA分子标记是近年来随着核酸分子技术的发展 RFLP标记是一项综合技术，涉及DNA片段的克 而研发的，在基因定位、品种鉴定、遗传图谱构建等方 隆、基因组DNA的提取、限制酶消化、电泳、sonhern 面得到了广泛的应用_221。根据DNA分子标记所采用的 印迹转移、DNA探针制备及分子杂交等一系列技术。 核心技术大体上可分为两大类 ：一是 以分子杂交 2．1．1．2 RFLP标记的特点 (southern杂交)为基础的DNA分子标记技术，另一类是 (1)RFLP起源于基因组DNA变异 ，探针可随 以PCR为基础的DNA分子标记技术2_『。随着测序技 机选取，每个标记变异大，检测方便，可以检测核糖体 术的发展和基因结构的深入认识，诞生了以PCR为基础