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中国农业科学 2006,39(10):2138-2146
Scientia Agriculra Sinica
紫杉醇合成途径中紫杉烯合成酶cDNA的克隆
1，2 1 1
肖 颖 ，赵 冬 ，王 刚
1 2
（河北师范大学生命科学学院，石家庄 050016 ； 石家庄学院化学系，石家庄 050801 ）
摘要：【目的】研究紫杉烯合成酶超表达对紫杉醇代谢的影响，以提高红豆杉属植物细胞中紫杉醇的含量。【方
法】从南方红豆杉（Taxus chinensis var. mairei ）愈伤组织提取总RNA，根据已发表的中国红豆杉紫杉烯合成
酶cDNA序列设计两对引物，通过RT-PCR技术扩增出该酶5′端长度为1 201 bp和3′端长度为1 388 bp的两个cDNA
片段，将其克隆到 pGEM-T Vector 上并转化到 E. coli DH5α中，5′端片段经 Xba Ⅰ和Bgl Ⅱ双酶切鉴定，3′端片
段经BglⅡ和SacⅠ双酶切鉴定后，对阳性克隆进行序列测定。两片段与双元载体pCAMBIA1300-35S::GUS以T4 DNA
连接酶连接并转化到 E. coli DH5α中，经 Xba Ⅰ和Sac Ⅰ双酶切鉴定。【结果】测序结果证实确为紫杉烯合成酶
基因，酶切结果证实紫杉烯合成酶cDNA全长连接成功并插入到pCAMBIA130035S::GUS中。【结论】两cDNA片段拼
接得到全长 2 589 bp 的紫杉烯合成酶基因，编码 862 个氨基酸，与中国红豆杉紫杉烯合成酶基因具有 98%的同源
性；成功构建了pCAMBIA130035S-TS载体，为下一步的转基因工作做好了准备。
关键词：南方红豆杉；紫杉醇；紫杉烯合成酶；cDNA克隆
cDNA Cloning of Taxadiene Synthase Functioning in
Taxol Biosynthesis
1,2 1 1
XIAO Ying , ZHAO Dong , WANG Gang
( 1The College of Life Science, Hebei Normal University, Shijiazhuang 050016;
2Department of Chemistry , Shijiazhuang College, Shijiazhuang 050801 )
Abstract: 【Objective 】The objective was to study the effects of taxadiene synthase over expression in taxol metabolism, and to
increase taxol production. 【Method 】Total RNA was extracted from Taxus chinensis var. mairei callus. Two primer pairs were
designed according to the taxadiene synthase sequence of Taxus chinensis. 5′- terminal 1 201 bp cDNA fragment and 3′- terminal 1
388 bp cDNA fragment of taxadiene synthase were isolate
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