家蚕转基因载体pBacA3EG的构建及其表达.pdfVIP

维普资讯 昆 虫 学 报 ActaEntomologicaSinica，October2005，48(5)：799—803 ISSN0454．6296 家蚕转基因载体 pBacA3EG的构建及其表达 徐汉福 ，夏庆友 ，刘 春 ，吴雪峰，杨远萍，赵 萍，向仲怀 (西南农业大学 ，农业 部蚕桑学重点实验室 ，重庆 400716) 摘要 ：以家蚕 Bom6y mori肌动篮 白A3(actin3)启动子 、增强性绿色荧光蛋 白(enhancedgreenfluorescentprotein，EGFP)基因及 SV40的多聚腺苷酸识别序列为元件 ，绝多次克隆，将其插入到 piggyBac转座载体中。经 PCR、酶切鉴定及测序表明各元件已按 JI确 的方式插入到 piggyBac载体中。将构建好 的 piggyBac表达载体显微注射到胚盘形成前期 的蚕卵 中，侄胚胎早期发育 的第 3天 ，通过体视荧光 微镜检测到蚕卵 内发Ⅲ较强的绿色荧光 。结果表明该载体构建正确且能在蚕卵中进行表达。家蚕转基 因载体 的体外瞬时表达小但是成功进行家蚕转基 因所必需的第一步 ，而且其 自身也可以应用于基 因的功能研究 ，为家蚕后基 因组研究 奠定 r基础 。 关键词 ：家蚕 ；转 慕因 ；A3启动子 ；pig~,Bac；绿色荧光蛋白 中图分类号 ：Q966 文献标识码 ：A 文章编号 ：4054—6296(2005)05—0799—05 Construction and expression ofthetransgenic vectorpBacA3EG in the silkworm Bombyxmori XUHan—Fu，XIAQing—You ，LIUChun，wUXue—Feng，YANGYuan—Ping，ZHAOPing，XIANGZhong—Huai(The KeySericuhuralLaboratoryofAgricuhuralMinistry，SouthwestAgricuhuralUniversity，Chongqing400716，China) Abstract：Usingthreebasicelements， i e．，actin 3promoterofBombyxmori，enhanced green fluorescentprotein (EGFP)geneandtheidentifiedsequenceofpolyadenylationacidinSV40，thepiggyBactransposonvectorpBacA3EG wasconstructed．ThisvectorwasfurtherconfirmedbyPCR，enzymedigestionandsequencinganalysis，andtheresults showedthatallelementshadbeen inserted intothepiggyBacvectorcorrectly．Strongergreenfluorescentwasobserved underthestereoscopicfluorescencemicroscopethree daysafterthe reconstructed vectorwasinjected intothe preblastodermiceggs．Theresultsshowedthatthevectorwasconsturctedcorrectlyandexpressed in silkwomr eggs．The transientexpressionofsilkworm transgenicvectorisnotonlythefirststepnecessary forsilkwomr transgene，butalsocan beapplied ingenefunctionanalysis，whichestablishesthefoundationofrfunctional studiesofsilkworm genome． Keywords：Silkworm；transgenesis；actin3promoter；piggyBac；greenfluorescentprotein 家蚕 Bom