索拉非尼诱导K562细胞凋亡机制的研究.pdfVIP

· l402 · 广东医学 2011年6月第 32卷第 11期 GuangdongMedicalJournalJune．2011，Vo1．32，No．11 索拉非尼诱导 K562细胞凋亡机制的研究冰 肖若芝，陈琰，王立琳 ，何程明，阮星星，熊慕堵，林东军 中山大学附属第三医院血液科(广州510630) 【摘要】 目的 观察索拉非尼对BCR—ABL阳性人慢性粒细胞白血病细胞株 l(562的增殖、凋亡作用，探索多 靶点抗肿瘤药物索拉非尼诱导 l(562细胞凋亡可能机制。方法 CCK一8法观察索拉非尼O、5、7．5、lO、l2．5、15、20 I~mol／L作用48h后K562细胞增殖活力变化；AnnexinV／PI双染法观察索拉非尼0、5、1O、l5、20I~mol／L对 I(562细胞 株的早期凋亡诱导作用；PI单染法观察索拉非尼对K562细胞株晚期凋亡诱导作用。Hochest33342染色法观察索拉 非尼所致 l(562细胞凋亡形态学变化。免疫印迹法检测凋亡相关蛋白PARP变化。结果 索拉非尼以浓度依赖的方 式抑制K562细胞株增殖，诱导细胞凋亡及凋亡相关蛋白PARP剪切。结论 PARP剪切是执行凋亡功能的caspase 途径活化的一个标记，提示索拉非尼诱导K562细胞凋亡的机制与 easpase级联反应活化有关，多靶点抗肿瘤药物索 拉非尼用于治疗慢性粒细胞白血病及伊马替尼耐药的慢性粒细胞白血病具有潜在的应用前景。 【关键词】 索拉非尼；K562细胞；细胞凋亡；PARP Mechanism ofsorafenibininducingapoptosisofK562ceHs． XIAORuo—zhi，CHEN Yan，WANGLi—lin，HE Cheng — uring，RUAN ng—xing，XiongMu—jan，LINDong一 n．DepartmentofHematology，theThirdAffiliatedHospital，Sun Yat—sen University，Guangzhou510630，China 【Abstract】 Objective ToobservetheeffectsofsorafenibonproliferationandapoptosisofBCR／ABLpositivehu— manchronicmyelogenousleukemiacell—lineK562．M ethods K562cellswereculturedwithdifferentconcentrationsof sorafenib(O，5，7．5，10，12．5，15and20~mol／L)for48h．CeilviabilitywasdeterminedbyCCK一8assay．Apopto— sisWas conductedbyAnnexinV／PI．PIstainingandHochest33342．PARPproteinwasdetectedbyWesternblotting．Re- suits Sorafenibinducedinhibitionofcellgrowth．cellapoptosisandPARPcleavagewereobservedindose—dependent manners．Conclusion PARPcleavage，amarkerofcaspasecascadesactivation，isinducedbysorafenib，suggestingthat sorafenibinducesK562apoptosisviathispathway．Thusitprovidestherapeuticeffectsofsorafenibonimatinib—resistnat chronicmyeloidleukemia． K【eywords】 sorafenib；K562；apoptosis；PARP 慢性粒细胞 白血病 (CML)特征性的分子生物学标 凋亡的机制。 记为BCR—ABL融合基因编码的BCR—ABL融合蛋 1 材料与方法 白。伊马替尼有效抑制 P210 融合蛋 白，诱 导 1．1 主要试剂 索拉非尼购于拜耳医药公司，小牛血 CML慢性期血液学的完全缓解并将 CML患者5年无 清购于杭州四季青公司，RPMI1640培养基、CCK一