全肠外营养诱导线粒体应激介导的肝细胞凋亡的研究.pdfVIP

维普资讯 肝脏2008年 6月第 13卷第 3期 · 219 · · 论 著 · 全肠外营养诱导线粒体应激介导的 肝细胞凋亡 的研究 王晖 谢青 金晓龙 蔡伟 林兰意 刘芸野 【摘要】 目的 探讨全肠外营养诱导新生乳猪线粒体应激介导的肝细胞凋亡 的作用机制。方法 以肠内营养乳猪 作为对照，建立全肠外营养新生乳猪实验动物模型，喂养 7d后获取肝脏组织 ，分离原代肝细胞 ，部分肝组织应用琼脂糖 凝胶 电泳检测肝细胞 DNA凋亡条带，通过凋亡蛋 白活性测定、免疫组织化学、Westernblot印迹法等检测全肠外营养诱 导肝细胞发生凋亡的蛋 白表达 。结果 全肠外 营养组乳猪肝细胞活率为 (49±21) ，明显低于肠 内营养组的 (88± 14) (P0．05)。全肠外营养乳猪肝组织 DNA 电泳呈现典型梯形凋亡条带 ，细胞凋亡 ELISA检测发现细胞凋亡定量 高达对照组 的2．6倍 ，半胱天冬氨酸蛋 白酶 (caspase)一3活性也 明显升高 ，与肠 内营养相 比增高 9．9倍 ，但 ATP酶活性 下降了 24 。Westernblot显示全肠外营养组肝组织 中相关凋亡蛋 白酶 PARP、caspase-9和一7蛋 白酶原被活化 ，Bcl一2 蛋 白表达量下调 ，Bax蛋 白量表达上调 ；同时线粒体 内细胞色素 C释放至胞浆内，使胞浆 内细胞色素 C表达水平升高 。 免疫组织化学也显示全肠外营养组 Bax表达上调 。结论 全肠外营养可 以损伤肝组织，并通过线粒体应激信号传导通 路诱导肝 细胞 凋亡 。 【关键词】 全肠外营养 ；肠 内营养 ；线粒体应激 ；细胞凋亡 Thestudy oftotalparenteralnutrition induced hepatocyte apoptosismediated by mitochondrialstress pathway WANGHui，XIEQing，JIN Xiao—long，CAIWei，LIN Lan—yi，LIUYun—ye． DepartmentofInfectiousDisease， ShanghaiJiaotongUniversityMedicalSchool，Shanghai200025，China Correspondingauthor：XIEQing，E-mail：xieqing @yahoo．corn．cn [Abstract] Objective Toinvestigatetotalparenteralnutrition (TPN)一inducedapoptosisofhepatocytesmediated bym itochondrialpathwaywithneonatalpigletsasananimalmode1．M ethods Neonatalpigletsweresacrificedfollowing7 daysonTPN ，whilecontrolanimalsreceivedenteralnutrition (EN)．Followingremovalofsmallliversegmentsformor— phologicandmolecularanalysis，piglethepatocytes(PH)wereisolatedbyperfusionwithcollagenaseandSUbjectedto functionalandmetabolicstudies．DNA fragmentation，celldeat