人SUMO-2基因原核表达、纯化及多克隆抗体制备.pdfVIP

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2017-09-13 发布于河北
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维普资讯 710 ISSN1007—8738细胞与分子免疫学杂志 (ChinJCellMolImmuno1)2008，24(7 · 论著 · 文章编号：1007—8738(2008)07—0710—04 人 SUMO-2基因原核表达、纯化及多克隆抗体制备杨振。，宋振，安宁。，王劫。，郭霭光，雷鸣，郭泽坤 (西北农林科技大学生命学院，陕西省农业分子生物学重点实验室，陕西杨凌712100) Prokaryoticexpression，purificationand [摘要] 目的：构建人SUMO-2基因的原核表达载体，纯化融合蛋白GST—SUM02一SUM02并以其为抗原免疫家兔，制备 preparation ofpolyclonalantibody for 人SUMO．2多克隆抗体。方法：用PCR的方法得到人SUMO-2 humanSUMO-2gene 基因并克隆至 pET41a(+)原核表达载体中，转化大肠杆菌 B1221(DE3)plysS诱导融合蛋白GST-SUM02-SUMO2表达；所 YANG Zhen。 SONG Zhen ，AN Ning ，WANG Jie。，，获得的可溶性蛋白经亲和层析纯化、SDS电泳鉴定后， GUOAi-guang。一， LEIMing ’ ，GUO Ze．kun’ 免疫家兔制备抗血清，分别采用ELISA、Westernblot检测抗 CoUegeofLifeSciences，NorthwestA ＆ FUniversity，Yangling，体效价和特异性。结果：测序证实重组质粒 pET41a(+)一SU— ShamaxiKey Laboratory ofMolecularBiology forAgriculture， MO2一SUM02构建成功；SDS．PAGE结果证实获得M 为52000 Yanglin712100，China 的GST-SUM02-SUM02融合蛋白且为可溶性蛋白；经过 GST 亲和层析有效纯化；以该融合蛋白免疫家兔制备得到的抗血 [Abstract] A ：Toconstructaprokaryoticexpression 清经 Westernblot检测证实能与目的蛋白发生特异性结合， vectorofhuman SUMO-2．purifyGST-SUMO2-SUMO2fu— ELISA检测为阳性。结论：获得了人 SUMO一2蛋白及特异性多 sionprotein producedbythe expression system，andpre- 克隆抗体，对进一步研究人SUMO-2及SUMO第二类家族的 pareitsantiserum．METHODS：Thehuman SUMO-2gene 功能提供了有用工具。 wasamplifiedbyPCR．Thetargetfragmentdigestedbythe [关键词]人SUMO-2；原核表达；蛋白纯化；抗血清 enzymewasclonedintoapET41a(+)expressionvectorand