单核苷酸多态性检测技术的研究.pdfVIP

48 激《光杂志》20。 夸铲多态性{蓉 f黼V(0。．2．N。．．20) 单核苷酸多态性检测技术的研究 ，1．DepartmentofLabMedical，No．425HospitalofPLA。Sanya572100，China； 、 ＼2．DepartmentofPhysics，ThirdMilitaryMdeicalUniversity-Chon嗣ing400038，China] 褒卉 碧姜量 警安孽篁警i0l詈m．SNP)~p 票蠹釜雹导君黎 皂誉蔷肇 磐 --jx． 甚 ~~z3JH‘ I3起7的 耄变 芬菥：嵩 羹 0一。百万个 挚 和孽企 1~．DNA)售~萋 冬 。 1- sNP 不同个棠体在某耋一特定位置上的核苷酸差异 菘 7／ ， 它具有数量大 、 测、遗传疾病和新药研发等方面具有重要应用价值，这就为 重视，被认为是现代临床检验发展 的一个新方向2．3J。其基 临床检验工作提出了巨大挑战。 本原理与传统光学和电化学原理完全不同，既集中了其他类 在具体表现上，通常认为 SNP只有两种类型，即双等位 型基因传感器检测 DNA杂交高度灵敏性和高度特异性的优 基因的转换和颠换，二者之比为2：1。SNP在 CG序列上出现 点，又有成本低廉、易于临床实用推广等独特优势，成为该领 最为频繁，而且多是 C转换为T，原因是CG中的c常为甲基 域一个新的检测技术。 化的，自发地脱氨后即成为胸腺嘧啶T。面对高度复杂的人 压电石英谐振传感器是一种质量敏感性传感器 ，晶体振 类基因组，要从约30亿碱基对 中鉴别分型单个碱基 的变化 荡频率对其表面质量的微小改变高度敏感。检测 SNP原理 无疑是一件巨大的工程。因此建立一种灵敏准确、高通量、 是：以石英晶振为传感器，以生物敏感成分为分子识别元件 ， 简便易行的全基因组扫描分析方法对 SNP的检测特别重要， 直接固定在传感器表面，利用压电晶体对其表面微质量变化 也是 SNP检测技术的发展方向。 的高度敏感性 ，可以直接感知和放大表面物质的变化，结合 从理论上讲，任何用于检测单个碱基突变或多态的技术 生物识别系统而形成的一种 自动化分析检测系统。该系统 都可用于SNP的识别和检出，目前已发展出20余种 SNP分 可利用物理学上频率信号的改变反映出传感器芯片表面生 析的基本方法。如DNA测序 、限制性长度多态性 (restriction 物学变化。 fragmentlengthpolymorphism，RFLP)、等位基 因特异性 PCR 声表面波生物传感器检测原理：利用压电晶体的特殊切 (ASPCR)、等位基因特异性寡核苷酸探针杂交 (alleliCspecific 向(如Y方向切割36~旋转 、x方向传播的LiTaOs)激励出漏声 Oligonueleotide,ASO)、单 链 构 象 多 态 性 (Single stand 表面波(1eakysurfaceacousticwave，I．SAW)，当LSAW传播路径 conformationpolymorphism，sscP)等。这些技术必须通过凝胶 表面的质量负载发生微小改变时，传感器表面的边界条件将 电泳进行检测 ，因此难以实现大规模操作 ，也不适用于 SNP 发生改变，导致 LSAW传播的相位 ／频率发生相应的改变，从 的自动化批量检出：同时，假阳性也是造成多种人工精心设 传感器输出换能器提取的电信号的相位／频率的变化 ，即可 计的方