三黄鸡α干扰素的克隆、表达及抗病毒活性初步研究.pdfVIP

动物医学进展 ，201l，32(1O)：63—66 ProgressinVeterinaryM edicine 三黄鸡 Q干扰素的克隆、表达及抗病毒活性初步研究 李秋 霞 ，刘永录 ，龚 剑 ，马仲彬 ，陈乃壮。，杨 明锋 ，张 国祖 (1．河南省康星药业有限公司，河南中牟 451464；2．郑州牧业工程高等专科学校，河南郑州 450011； 3．辽宁省辽阳市种畜场 ，辽宁辽阳 liIOOO) 摘 要 ：采用PCR方法从三黄鸡血液基因组中扩增鸡 Ct干扰素全基 因，并克隆和测序 。序列分析表 明， 基 因全长为582bp，亚克隆其成熟蛋 白编码基因489bp。将该片段与表达载体 pET一28a连接克隆至大肠埃 希菌DH5a菌株，经测序和酶切鉴定 ，选取正向插入、读码框正确的阳性克隆。构建重组质粒并转化 BL21 (DE3)，经 IPTG诱导，融合蛋白以包涵体形式在 BL2l(DE3)高效表达，经 His亲和层析柱得 以纯化。鸡胚 试验表明，重组干扰素抵抗新城疫病毒效果显著，能保护鸡胚并能够延迟和减少新城疫病毒的复制。 关键词 ：鸡 d干扰素；原核表达；抗病毒活性 中图分类号：Q789 文献标识码 ：A 文章编号：1007—5038(2011)10—0063—04 自Issaca等在 1957年发现干扰素 (interferon， 病毒活性和免疫增强作用 ]。研究表 明，重组干 IFN)以来 ，已经证明不论高等动物还是低等动物都 扰素与天然干扰素具有同样 的抗病毒和免疫调节活 有干扰素类似物质产生。干扰素是一种具有广谱抗 性 ，因此重组干扰素的研究和应用将成为家禽养殖 病毒、抗肿瘤和增强免疫功能的细胞 因子口]。干扰 中增强鸡的免疫 ，减少发病 ，降低鸡的死亡率的重要 素分为I型和 Ⅱ型两类 。I型干扰素包括 IFN—a和 方向[1 ]。本研究应用 PCR方法从三黄鸡血液 中 IFN—B等，Ⅱ型干扰素又称免疫干扰素即 IFN一7[2]。 克隆了IFN—a基因，并在大肠埃希菌中获得 了高效 a干扰素主要来源于 B淋 巴细胞和巨噬细胞 ，B干扰 表达 ，为重组干扰素作为新型广谱抗病毒生物制剂 素主要来源于成纤维细胞和上皮细胞 ，两者主要活 奠定了基础。 性是抗病毒。而 干扰素是机体在发挥免疫作用后 l 材料与方法 通过作用于巨噬细胞而发挥其抗病毒活性 的，主要 1．1 材 料 由T淋巴细胞产生[3]。 1．1．1 质粒和茵株 原核表达载体 pET28a、大肠 鸡 (It干扰素 (chickeninterferon-alpha，ChlFN— 埃希菌(Escherichiacoli)DH5a和 BL21由河南省 a)全基因为582个碱基 ，编码 l93个氨基酸 ，其中前 康星药业有限公司研发部实验室保存 。 31个氨基酸为信号肽 ，后 162个氨基酸为成熟蛋 1．1．2 鸡胚和病毒 9日龄鸡胚为郑州瑞祥孵化 白，蛋 白分子质量约为 l9ku。SekellickMJ等[5于 厂孵化；新城疫病毒由河南农业大学禽病研究所惠 1994年首次成功克隆和表达 了ChIFN—a基 因，并进 赠 。 行了结构分析。文献报道 已成功克隆了惠阳胡须 1．1．3 酶和试剂 限制性内切酶 NcoI、NheI、 鸡 。和丝羽乌骨鸡 IFN—a基因 。陈红英等 。用原 SalI为 Fermentas公司产品；普通 D