砂箱中柴油降解菌株的分离鉴定.pdfVIP

第31卷 第3期 桂 林 理 工 大 学 学 报 Vo1．3lNo．3 2011年 8月 JournalofGuilinUniversityofTechnology Aug． 2011 文章编号：1674—9057(2011)03—0450—40 砂箱 中柴油降解菌株的分离鉴定 杨金凤 ，曹冠楠 ，杨正礼 (1．中国农业科学院农业环境与可持续发展研究所 ，北京 100081； 2．中国地质大学(E京)水资源与环境工程北京市重点实验室，北京 100083) 摘 要：以0柴油为唯一碳源，从模拟生物修复柴油污染土壤的砂箱中筛选出4株柴油降解菌株B一 1、B一2、B一3和B一4，根据形态学观察及 16SrDNA序列比对分析，4株菌株分别属于微杆菌属 (Microbacteriumsp．)、短波单胞菌属 (Brevundimonassp．)、Tetrathiobacterkashmirensis、假单胞菌属 (Pseudomonassp．)，且菌株B一3是2005年在克什米尔某处果园土壤中新分离出来的柴油降解菌株。 此外，通过比较各菌株的生长曲线，菌株B一3和菌株B一4较其他两株菌优先进入对数生长期，对加 快柴油的生物降解意义重大。 关键词：柴油；优势降解菌；16SrDNA测序；聚合酶链反应 中图分类号：Q93—331 文献标志码：A 石油及其产品在生产、运输、使用等环节中 装填入 1000mmx800mm×1000mm的长方体砂 产生的泄漏给外界环境带来了严重危害，已经逐 箱装置中 J，并将市售O柴油配制成油污土装入 渐引起人们的广泛关注…。目前，针对挥发性较 油污区，从砂箱中取样，富集、分离、筛选获取 强的石油组分，如汽油，可以通过土壤气相抽提 微生物菌种 。 得到很好的修复，但对于挥发性较弱或半挥发性 1．1．2 培养基的配制 牛肉膏蛋 白胨培养基：牛 的组分，更倾向于生物处理，因其克服了物理和 肉膏 5g，蛋白胨 10g，NaC15g，蒸馏水 1000mL， 化学修复的工程量大、费用高、易造成二次污染 pH=7．2～7．4，121oC灭菌20min；LB液体培养 等缺点。石油烃类污染物 由于其组成的复杂性、 基 ：蛋 白胨 10g，酵母菌5g，NaC110g，蒸馏水 生物难降解性等特点，筛选高效降解石油的微生 1000mL，pH=7．2～7．4，121℃灭菌30min。 物菌种已成为生物修复的必然。本试验通过从修 1．1．3 试验仪器与设备 小型无菌操作台、智能 复柴油污染土壤的砂箱装置中富集、分离污染土 生化培养箱、空气浴振荡器、不锈钢手提式高压 壤中的柴油降解菌，并对其进行形态观察和分子 蒸汽灭菌锅、SE812型氮吹仪、紫外一可见分光光 生物学鉴定，希望获得柴油优势降解菌株。 度计、6820气相色谱仪等。 1．2 试验方法 1 材料与方法 1．2．1 柴油降解菌株的富集、分离、纯化 在砂 1．1 供试材料 箱的取样点处各取土样3g，加入30mL的无菌 1．1．1 菌种来源 本试验将取 自北京水利科学研 水，25℃，165r／min振荡24h，将 10mL振荡后 究所永乐镇现场的实地砂土 (砂粒98．39％，粘粒 的培养液转入无菌试管中，再在此试管中取 1mL 1．61％)，自然风干、除杂、研碎，过 2mm筛， 加入9mL无菌水中，依次取5次，稀释倍数依次为 收稿 日期 ：2OlO一11—20 基金项目：科技部国际科技合作项 目 (2006DFA21180) 作者简介：杨金凤 (1981一)，女，博士，助理研究员，研究方向：地下水科学与工程，yulin6206@163．COrn。 引文格式：杨金凤，曹冠楠，杨正礼．砂箱中柴油降解菌株的分离鉴定 [J]．桂林理工大学学报，2011，31(3)：450—453 第 3期 杨金凤等 ：砂箱中柴油降解菌株的分