鸭梨Hc ISSR-PCR反应体系的优化.pdfVIP

北方 园艺2011(12)：89～92 ·生物技术 · 鸭 梨 HcISS PCR 反 应 体 系 的优 化 支 婷 ，刘 春 琴 ，崔 建 州 ，杜 克 久 (1．河北农业大学 林学院 ，河北 保定 071000；2．沧州市农林科学院，河北 沧州 061001) 摘 要：应用正交设计的方法对影响鸭梨HcISSR-PCR反应的4个因素 (模板 DNA、引物、 dNTPs、TaqDNA聚合酶)进行 5个水平的优化试验，以DPS7．55软件分析。结果表明：鸭梨Hc ISSR-PCR 的最佳反应体系(2O肚L)为 ：模板 DNA 6Ong、引物浓度 0．4~／mol／L、dNTPs浓度 0．1 mmol／L、TaqDNA 聚合酶 2U。 关键词：鸭梨 Hc；ISSR-PCR反应体系；正交设计；优化 中图分类号：S661．2 文献标识码 ：A 文章编号：1001--0009(2011)12一O089—04 鸭梨 (PyrusbretschneideriRehd．CV．Yali)属 白梨系 鸭梨 Hc疑似普通鸭梨芽变新 品种，发现于沧州 统，原产于河北 ，是古老的优质高产品种。鸭梨距今栽 泊头市鸭梨园，经连续数年 田间观测，鸭梨 He高抗梨 培历史已有千年，在长期的栽培过程 中，会 自发 的产生 黑星病 。鸭梨 Hc外观除叶色较深外 ，与对照普通鸭 新变异类型。据文献记载口]，我国已从不少鸭梨产区筛 梨无明显差异，果实 口感与普通鸭梨一样 。将其枝条 选出优 良芽变品系和优 良单株 ，其 中大果系 8个、优质 嫁接到其它梨树 ，嫁接树也表现对梨黑星病抗病。为 系2个、自花结实系3个 、早熟系及垂枝系各 1个。鸭梨 快速区分鸭梨 Hc抗梨黑星病是可遗传 的芽变还是由 抗梨黑星病能力弱，属高感梨黑星病品种，梨黑星病 的 环境因素引起的饰变 ，常采用分子标记方法进行鉴定。 危害常给鸭梨生产造成严重损失。从鸭梨 自然突变体 ISSR(intersimplesequencerepeat，简单序列重复 中选育既抗梨黑星病，又能保持鸭梨优 良品质的芽变品 区间)分子标记技术_2是一种新型的微卫星类分子标 系或单株 ，是 目前解决鸭梨发生梨黑星病的根本措施。 记技术 ，它综合了其它分子标记技术的优点 ，能反映出 比RFLP、SSR和 RAPD更丰富的多态性 ；为显性标 记，具有较好 的稳定性；引物退火温度较高 (一般为 第一作者简介：支婷 (1984一)，女，在读硕士 ，研究方向为林木化学 52～55℃)，保证了PCR扩增的重复性；DNA用量少 ； 保护 。E-mail：tingtingzhi@126．coin。 操作简单 ；成本低 。因此 ，ISSR分子标记技术被广泛 责任作者 ：杜克久(1965一)，男，博士，教授 ，现主要从事植物基 因工 用于品种资源鉴定_4-6l、亲缘关系分析l7]、遗传多样性 程方面的研究工作 。E-mail：duk~iu@yahoo．corn,cn。 研究 以及作为构建遗传 图谱 的有力工具。由于 基金项 目：“十一五”国家科技支撑计划资助项 目(2006 DO8AO3—