影响分裂相指数的各环节控制与染色体制备效果分析.pdfVIP

4156 现代预防医学2009年第 36卷第2l期 ModemPreventiveMedicine 2009，Vo1．36，NO．21 ， 文章编号：1003—8507(2009)21—4156—02 中图分类号：R394．2 文献标识码：A 【实验技术及其应用】 影响分裂相指数的各环节控制与染色体制备效果分析 赵小平 ，曾永秋 ，赵矫 ，黄燕，税青林 摘要： [目的]对影响分裂相指数的各环节进行优化控制 分析该条件下染色体标本制备效果。 [方法 ]在外 周血淋巴细胞培养染色体标本制备的基本过程中，对细胞培养、细胞周期阻滞、细胞收获等步骤中与分裂相指数相关的曩。j 各环节进行优化控制。采用显微镜下直接观察、计数及染色体分散面积测量等方法对控制后的标本制备效果进行分析 囊童 [结果]在优化条件下所得染色体标本分裂相数较多 染色体分散良好、制备效果稳定。 [结论]该优化控制方案可 获得理想的可供分析的染色体分裂相，效果稳定，曩保证了外周血淋巴细胞染色体制备及分析的成功率。 舅一 j。 |关链 分聚枢 崴 散暴食 l l | 人体外周血淋巴细胞培养和染色体标本的制备是医学遗传 化控制 ．具体做法如下 ： 学教学的基本实验内容之一，同时也是 目前临床遗传学诊断的 (1)采血 时尽量避开患者非常时期 ，如感染 、放、化疗 中 基本技术手段。实验基本过程主要包括淋 巴细胞的培养 、细胞 或放 、化疗后 、近期有用药史 、新生儿高胆 固醇血症期等。 周期的阻滞 、低渗、固定、制片、显带等步骤 ，而由于各实验 (2)与染色体分裂相指数相关操作过程的量化控制如表 1 室对每一步的量化控制不 同，使得染色体标本 的制备效果有所 所示。 差异。本遗传室对外周血细胞培养和染色体制备 的每一步 ，特 别是影响分裂相指数的各环节进行严格的控制和优化 ，使可观 表 1 染色体分裂相指数相关环节量化表 察计数的分裂相数 目维持在理想水平 ．有效保持染色体标本制 备质量的稳定性 ，从而保证了后续分析。 1 材料与方法 1．1 材料 肝素钠抗凝静脉血 、RPMI1640培养基 (含 20％小牛血 清)、植物凝集素 (PHA)、10 g／rrd秋水仙素 (终浓度 0．1 g／fn1)、隔水式 电热恒温培养箱、恒温水浴箱、离心机等 。 1．2 方 法 1．2．1 控制和优化方案 外周血淋巴细胞培养及染色体标本制 备的基本操作按照常规方法…进行，对其 中几个环节进行了优 作者简介：赵小平 (1957一)，女 ，大专 ，实验师，研究方 向：医学生 物与遗传学 1 ． 2．2 效果评估 染色体分裂相在 100~10油镜下观察 ，长短 作者单位 ：泸州 医学院医学生物学与遗传学教研室 ．泸州．646000 现代预防医学 2009年第 36卷第 21期 ModernPreventiveMedicine，2009，Vo1．36，NO．2l ·4l57 · 适中、轮廓清晰、重叠少、周 围无散落 ，染色体无扭 曲、带深 浅分明、分散 良好作为核型分析 的标准 ，通过计数不 同批次实 3 讨论 验 中每张片分裂相数及染色体分散面积 (具体测量方法参照 在外周血淋 巴细胞染色体标本制备过程中常由于染色体分 Spurbeck 的方法)对优化控制后 的效果进行评估。 裂指数低 ，而使得可观察分裂相达不到核型分析 的标准，给染 色体分析和临床诊断带来困难。实际操