RNA 干涉介导大鼠成肌细胞系L6 中MuRF-1 与FOXO3a 基因表达变化的研究.pdfVIP

( ) 2013 5 3 2 Chin J Cell Stem Cell (Electronic Edition), May 2013,Vol. 3, No. 2 中华细胞与干细胞杂志 电子版 年 月第 卷第 期 87 •论著• RNA 干 涉 介 导 大 鼠 成 肌 细 胞 系 L6 中 MuRF-1 与 FOXO3a 基因表达变化的研究 达志峰 贾英伟 丁洁 朱志祥 冯勇 韦建 梁炳生 【摘要】 目的 RNAi MuRF-1 FOXO3a 探讨 技术体外抑制 或 基因表达的效果，为 RNAi 介导的失神经骨骼肌萎缩基因治疗奠定基础。方法 体外培养大鼠成肌细胞系 L6 ， MuRF-1 FOXO3a siRNA Lipofectamine 2000 将 和（或） 重组质粒在 介导下转染，优化与检 测系统的转染效率；将 2 μg MuRF-1 或 FOXO3a 基因 siRNA 重组质粒转染 L6，转染后48 h 与72 h，采用实时定量PCR 检测siRNA 重组质粒对MuRF-1 和FOXO3a 的mRNA 的抑制效果， 使用 Western 印迹检测siRNA 重组质粒对 MuRF-1 和 FOXO3a 蛋白水平的抑制效果。用单 LSD 结果 1 24 h 因素方差分析方法和 法进行组间比较。 （）质粒转染后 ，荧光显微镜下 2 PCR 可见细胞中有大量明亮的绿色荧光表达，显示系统有较高的转染效率。（ ）实时定量 MuRF-1 FOXO3a siRNA 48 h 分析结果显示： 与 各自的 重组质粒转染后 ，二者干扰序列在 mRNA 水平分别明显抑制了 MuRF-1 和 FOXO3a 的表达，抑制率达 67 ﹪ 和54 ﹪，与对照 组相比差异均有统计学意义（P 0.05 ），联合MuRF-1 与 FOXO3a 两基因 siRNA 重组质粒 转染后 48 h 干扰序列在 mRNA 水平明显抑制了 MuRF-1 及 FOXO3a 的表达，抑制率达 ， 61 58 P 0.05 72 h MuRF-1 FOXO3a ﹪及 ﹪，与对照组相比差异有统计学意义（ ）；转染后 ， 与 各自的 siRNA 重组质粒干扰序列对 MuRF-1 和 FOXO3a 的mRNA 的抑制率分别达79 ﹪和 81 ﹪，联合MuRF-1 与 FOXO3a 两基因 siRNA 重组质粒干扰序列对 MuRF-1 和 FOXO3a 的 mRNA 77 72 P 0.05 48 h 的抑制率达 ﹪及 ﹪，与对照组相比差异均有统计学意义（ ），与 相比， 3 Western 48 h MuRF-1 抑制效应更为明显。（ ） 印迹灰度分析结果显示：转染后 ，干扰序列 MuRF-1 61 P 明显抑制了 蛋白的表达，抑制率达 ﹪，与对照组相比差异有统计学意义（ 0.05 ），干扰序列FOXO3a 明显抑制了FOXO3a 蛋白的表达，抑制率达 46 ﹪，与对照组相比 差异有统计学意义（P 0.05 ），联合MuRF-