RNAi 技术体外沉默肌肉环指蛋白1 的研究.pdfVIP

( ) 2013 5 3 2 Chin J Cell Stem Cell (Electronic Edition), May 2013,Vol. 3, No. 2 78 中华细胞与干细胞杂志 电子版 年 月第 卷第 期 •论著• RNAi 技术体外沉默肌肉环指蛋白 1 的研究 朱志祥 梁炳生 冯勇 达志峰 丁洁 韦建 贾英伟 【摘要】 目的 RNAi 1 MuRF-1 探讨 技术体外抑制大鼠肌肉环状指蛋白 基因表达 （ ） 的效果，筛选出针对MuRF-1 基因最有效的 siRNA 重组质粒。方法 根据大鼠 MuRF-1 基 mRNA 4 siRNA MuRF1- Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ lipofactamine 因的 序列，设计 组干扰序列，即 、 、 、 ，利用 2000 转染试剂将 siRNA 重组质粒转染大鼠成肌细胞系 L6 ，于转染后48 h 与 72 h ，采用实 时定量 PCR 和 Western blot 或免疫印迹检测其对 MuRF-1 表达的抑制效果。MuRFl 基因 siRNA 重组质粒瞬时转染后 mRNA 和蛋白质数据以 x ± s 表示。对照组与四组实验组的比 LSD 结果 1 PCR 较用单因素方差分析；多个样本均数的两两比较用 检验。 （）实时定量 显 MuRF1- ⅡⅢ Ⅳ MuRF-1 mRNA 48 h 示四组干扰质粒 Ⅰ、 、 、 对基因 的 的抑制率在转染后 分 67 31 11 20 F = 4.527 P = 0.024 72 h 别为 ﹪、 ﹪、 ﹪， ﹪，不同干扰序列的抑制效果有差异（ ， ）； 分 79 59 50 61 F = 19.088 P 0.001 别为 ﹪、 ﹪、 ﹪和 ﹪，不同干扰序列的抑制效果有差异（ ， ），与 48 h siRNA MuRF1- t = 8.201 P 相比，抑制效应更为明显，但以 Ⅰ的抑制效果最为明显（ , 0.001 2 Western MuRF-1 ）。（ ）使用 印迹灰度分析显示四组干扰序列对基因 的蛋白的抑 48 h 61 40 9 15 F 制率在转染后 分别为 ﹪、 ﹪、﹪和 ﹪，不同干扰序列的抑制效果有差异（ = 4.286 P = 0.028 72 h 70 54 30 46 ， ）； 分别为 ﹪