缺氧对巨噬细胞HMGB1释放的影响及其机制.pdfVIP

中国实验诊断学 2012年 5月 第 16卷 第 ～ 761 一 文章编号 ：1007—4287(2012)05—0761—04 缺氧对 巨噬细胞 HMGB1释放的影响及其机制 李 蕾 ，韩菲菲 ，王发龙 ，刘 洁 ，陈国千 “ (1．南京医科大学附属无锡人民医院 医学检验科 ，江苏 无锡 214023；2．南京医科大学附属无锡人 民医院 呼吸科) 摘要：目的 观察缺氧对巨噬细胞高迁移率族蛋 白B1(HMGB1)释放的诱导作用，并初步探讨其可能的机制。方 法 采用巨噬细胞株 RAW264．7，观察缺氧培养不同时间对培养上清液 中HMGB1含量、细胞 HMGB1mRNA表达 和 HMGB1胞 内分布 的影响，及不 同浓度 N一乙酰半胱氨酸对 HMGB1释放 的抑制作用。HMGB1含量和 HMGB1 mRNA表达水平分别采用酶联免疫吸附试验 、实时荧光定量 PCR法检测。结果 缺氧培养 6h后 HMGBImRNA 表达水平 已显示增强 (PO．05)，缺氧培养 12h后培养上清液中HMGB1含量明显升高 (PO．O1)，且显示 HMGB1 核浆转移；N～乙酰半胱氨酸对缺氧培养 HMGB1释放有剂量依赖性抑制作用。结论 缺氧能诱导巨噬细胞释放 HMGB1，其机制可能与胞 内氧 自由基产生有关。 关键词：高迁移率族蛋 白B1；缺氧；巨噬细胞 中圈分类号 ：R446．1；Q552 ．2 文献标识码 ：A 、 Hypoxiai‘nducedHMGB1releaseinmacrophagesanditsmechanism LILei，HANFei—fei，WA．NGFa—long，eta1．(De— partmentofMedicalLaboratory，WuxiPeople’SHospitalAffiliatedtoNJMU，Wuaci214023，China) Abstract：Objective Toinvestigatetheextracellularreleaseofhighmobilitygroupbox1(HMGB1)inmacropha— gesinducedbyhypoxiaanditspossiblemechanism．M ethods ThechangesofHMGB1mRNA expression，HMGB1 concentrationintheculturemedium andtheintracellulardistributionofHMGB1wereinvestigatedafterRAW264．7 macrophagesweresubjectedtohypoxia(1A0 O2)withdifferenthours．InhibitoryeffectofN-acetylcysteinewasob— servedonHMGB1release．TheHMGB1concentrationandthelevelofHMGB1mRNA expressionweredeterminedby ELISA andreal—timefluorescentquantitativePCR，respectively．Results ThelevelofHMGB1mRNA expression in— creasedafterRAW264．7macrophagesweresubjcotedtohypoxiaculturefor6h(P0．05)．TheHMGB1concentra— tion intheculturemedium significantly increasedandnuclearHMGB1wastranslocatedtothecytoplasm afterhypoxia culture{or12 h (P 0．01)．N—acetylcysteinepartlyinhibited extraeellularreleaseofHMGB1inhypoxia—cultured RAW264．7macrophagesinadose—dependentmanner．Conclusion HypoxiainducesmacrophagestoreleaseHMGB1， whichmaybeinvolvedwi