柔嫩艾美耳球虫真核起始因子3d基因的酵母表达分析.pdfVIP

中国动物传染病学报 2012，2O(2)：47—52 ChineseJournalofAnimalInfectiousDiseases · 研究论文 · 柔嫩艾美耳球虫真核起始因子 3d基因的 酵母表达分析 孔春林 ，韩红玉2 姜连连 ，王 晔 ，董 辉 ，赵其平 ，朱顺海 ，李 婷 ，薛 璞 ， 舒凡帆 ，黄 兵 (1．上海师范大学生命与环境科学学院，上海200234； 2．中国农业科学院上海兽医研究所 农业部动物寄生虫学重点实验室，上海 200241) 摘 要 ：在毕赤酵母真核表达 系统 中表达柔嫩艾美耳球虫真核起始 因子3d(Emedatenellaeukaryoticinitiationfactor3d， EtelF3d)基 因，并获得具有天然构象的活性蛋白。将EtelF3d基 因克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9k上，将构建正确的重组质 粒通过电激转化入酵母细胞GS115，用组氨酸缺陷培养基和G418分别进行筛选，获得含重组质粒的酵母表达细胞。在含 1％ 甲醇的BMMY培养基中诱导培养，收集 1～3d的表达上清。表达产物进行SDS．PAGE检测，并用Westernblot进行免疫学分析。 结果表明，本研究成功构建 了重组质粒pPIC9k-EtelF3d，并成功表达该蛋 白，且该蛋白能与兔抗 IF3d血清特异性结合，具 有良好的抗原性。EtelF3d基 因可在真核表达系统毕赤酵母 中表达，且获得蛋 白具有抗原性，从而为进一步研究该蛋 白的结构 和功能奠定了基础。 关键词：球虫；柔嫩艾美耳球虫；真核起始因子3d；毕赤酵母 ；真核表达 中图分类号：$852．723 文献标志码：A 文章编号：1674．6422(2012)02—00047—06 EXPRESSION 0FEUKARYoTIC INITIATIoN FACToR 3D GENE oF EIM ERlATENELLA PlCHlA PASToRIS KONG Chun．1in ，HAN Hong．Ⅵ ，JIANGLian．1ian， WANGYe，DONGHui，ZHAOQi-ping~， ZHU Shun．hai，LITing，XUEPu ，SHU Fan．fan，HUANGBing (1．CollegeofLeeandEnvironmentalSciences,ShanghaiNormalUn~emiff,Shanghai200234,China,2．KeyLaboratoryofAnimal Parasitology,ofMinistryofAgriculture,CA4S,ShanghaiVeterinaryResearchInstitute,Shanghai200241．Chin Abstract：Toefficientlyexpresseukaryoticinitiationfactor3d(elF3d1ofEimedatenellaineukaryoticexpressionsystemandobtain theactiveandnaturalprotein，elF3dgenewasligatedtoPichiapastorisexpressionvectorpPIC9k．Therecombinantplasmidwasthen trnasformedintoyeastcellsGS115byelecrtoporationtechnology．Thepositiveyeastcellscontainingrecombinantplasmidwerescreened withhistidine-deficientmedium andG418．Theproteinwasproducedinrecombinantyeastcellswithinductionof1％ methanolin BMMYmedium．Supernatantsampleswerecollectedfrom 1to3days．TheexpressedproductsweredetectedinSDSandWestern bl