大鼠脑出血后血肿周围组织中细胞凋亡的研究.pdfVIP

CHlNEs￡c0M UN{TY 0oCTORs 实验研究 大鼠脑出血后血肿周围组织中细胞凋亡的研究 邹志斌 邹国荣 物立体定向仪，流式细胞仪，超净工作台， 验中，因麻醉意外，有3只大鼠死亡，原因 338000江西新余市人民医院 台式低温高速离心机，凋亡检测试剂盒。 可能是麻醉过敏或其对麻醉药物的耐受 方法 ：①脑出血动物模型的建立：采 性低而导致呼吸抑制所致。大鼠死亡后 doi：10．3969／j．issn．1007—614x．2013． 用立体定向 自体血脑 内注射法制备动物 立即补充 ，最终50个样本。 04．001 模型，参考张祥建等方法…：用水合氯醛 血肿周围组织中的细胞凋亡情况：凋 摘 要 目的：动态检测大鼠脑 出血后不 腹腔内注射麻醉，将大鼠俯卧位固定于立 亡检测试剂盒双染色，流式细胞仪检测分 同时间段血肿周围组织中凋亡细胞比例， 体定向仪上，头部背侧备皮消毒；取额顶 析细胞凋亡率 ，对所有实验数据进行统计 从而证实脑出血后存在着细胞凋亡现 象。 部正中切 口，于前囟正 中后 2mm，右侧旁 分析，各组的细胞凋亡率用 (X±S)表示， 方法 ：制备动物模 型 ，分别于术后 6小时 ， 开3mm处用牙科钻钻孔 ；断尾收集 自体 分析结果如下 ：各实验组分别与对照组进 24小时，72小时，10天 4个时间点处死 血约80 l，微量注射器垂直颅骨进针约 行两两 比较，均存在 显著性差异，P 各组大鼠，制备脑组织单细胞悬液，通过 6mm缓慢匀速地将 自体血推进右侧尾状 0．O1)。动态变化趋势：脑出血后 6小时 凋亡检测试剂盒双染色后经流式细胞仪 核头。对照组只插入针头不注血；退针 细胞凋亡率即上升，24小时继续升高，72 检测细胞凋亡率。利用统计学软件 SPSS 后，用医用骨蜡封闭骨孔 ，止血后消毒，然 小时到达高峰，至 10天仍维持在较高水 17．0对 实验结果进行统计 学分析。结 后缝合头皮。②大鼠脑组织标本的采集 ： 平 。见表 1。 果：6小时组血肿周围脑组织中细胞凋亡 从 ICH模型建立后开始计时，分别于6小 率即显著高于对照组，24小时组细胞凋 时，24小时，72小时，10天4个时间点处 讨 论 亡率继续升高，72小时组达到高峰 ，10天 死实验组大 鼠，对照组于假手术后 10天 脑出血对脑组织的损害可分为原发 组有所 下降，但仍显著 高于对照组。结 处死。步骤如下 ：用过量水合氯醛腹腔 内 性损伤和继发性损伤，原发性损伤主要为 论 ：脑 出血后 ，血肿周 围脑组织 中脑细胞 注射麻醉，暴露心脏，用输液器针头行左 血肿 占位效应及出血对周围脑组织的直 凋亡率明显升高，72小时达到高峰 ，持续 心室穿刺，同时剪开右心耳 ；向左心室内 接破坏，对于原发性损伤，除早期血肿清 升高10天以上。 快速灌注 PBS溶液，直至右心耳流出清 除可以一定程度地减轻外，几乎无法进行 关键词 脑 出血 流式细胞仪 细胞凋 亮液体后停止；迅速断头并剪开颅骨完整 很好地干预，因此，对于继发性损伤的有 亡 取出脑组织 ，冠状位切开，取血肿周 围 效干预在脑出血后的治疗中显得尤为重 5mm以内的脑组织备用。标本用 PBS溶 要 。而脑出血后的继发性损伤又主要表 脑出血 (ICH)是一种常见的致死率 液固定后置于4℃冰浴中保存 ，并尽快进 现为细胞凋亡 ，细胞凋亡是 ICH血肿周 和致残率均很高的出血性脑卒中，是急性 行下游实验操作。③流式细胞仪检测细 围组织中细胞死亡的主要形式。本实验 脑血管病中最严重的一种 ，严重威胁到患 胞凋亡：冰上操作剪碎 、吹打、过滤、离心、 通过 自体血注入法构