黄花苜蓿不同种质材料的遗传多样性研究.pdfVIP

第 35卷 第 1期 中 国 草 地 学 报 2013年 1月 Vo1．35 NO．1 ChineseJournalofGrassland Jan．2013 文章编号 ：1673—5021(2013)0卜0061—06 黄花苜蓿不同种质材料的遗传多样性研究 高素玲 ，郭 丽 ，朱飞雪 ，杜建材 一，王照兰 ，胡卉芳 (1．河南农业职业学院，河南 郑州 451450；2．中国农业科学院 草原研究所 ／农业部草原资源与生态重点开放实验室，内蒙古 呼和浩特 010010) 摘要 ：采用 10 sDs一聚丙烯酰胺凝胶 电泳技术 ，以单株取样的方法对黄花苜蓿 4个品系和 5份其他种质共 9 份供试材料的种子贮藏蛋 白遗传多样性进行研究，并探讨 了它们之间的遗传差异 。结果表 明：9份供试材料可溶性 蛋白总条带数为 69条 ，总多态带为 56条 ，多态带百分率为 81．16 ；9份供试黄花苜蓿种质材料存在丰富的多样性， 其遗传多样性顺序为 861543297。5个相关种质含有比4个品系更加丰富的遗传多样性。9份供 试材料的总基因多样性为 0．2214，遗传分化系数为 0．4929。4个品系的基因分化系数大于 5个其他相关种质。基 于Nei’S遗传距离，用UPGMA法进行聚类 ，9份供试材料可以分为4类，但聚类反映出的亲缘关系与群体取样的研 究结果差异很大。 关键词 ：黄花苜蓿 ；种质材料 ；种子贮藏蛋 白；遗传多样性 中图分类号 ：S551．7 文献标识码 ：A 黄花苜蓿 (MedicagofalcataI．)是温带草原广 供试 4个黄花苜蓿品系及其 5个相关种质材料 泛分布的一种野生豆科牧草 q]，它抗旱、抗寒性强， 详见表 1。 又耐瘠薄，适于在寒冷、干旱地 区天然草地改 良和人 1．2 方法 工草地建设 中推广利用 ]。将黄花苜蓿作为亲本之 将每粒种子单独研碎 ，倒入 500~1离心管 中，加 一 与紫花苜蓿杂交 ，可以将黄花苜蓿的优 良抗性基因 入 50l样 品缓冲液)-[2 SDS(十二烷基硫酸钠)； 转入紫花苜蓿 ，从而提高紫花苜蓿 的适应性和抗逆 50mmol／ITris—HC1，pH6．8；5 的 J3一巯基 乙醇； 性[4】。由于黄花苜蓿的种子产量和草产量不高，在生 10 的甘 油；0．1 溴 酚 兰 ]，室 温 下 提 取 1h， 产中的直接栽培利用受到影响，因此有关黄花苜蓿的 10000r／min离心 10min，将上清液移入另一 5O0肚1 基础研究也 比较少。种子贮藏蛋 白技术是植物种质 离心管 中，置～8O℃冰箱备用。每份种质材料制 18 资源鉴定中广泛应用的一种生化标记。种子贮藏蛋 个样 品。每个样 品 电泳上样 10~,1，电泳上样前，将 白电泳提取蛋 白使用 的是干种子，其不受环境条件、 预先提取好的蛋 白取出，10o℃沸水浴 5min后进行 生长季节影响，电泳图谱的多态性 、稳定性较好 ，避免 电泳 。用 SDS—PAGE低分子量标准蛋 白作标记 了酶活性受时空影响的弊端，因此在植物遗传多样性 蛋 白(Marker)。 检测 、品种鉴定以及指纹图谱构建等研究中得到了广 采用垂直板 SDS一聚丙烯酰胺凝胶进行 电 泛的应用 ]。本研究利用我国黄花苜蓿丰富的资 泳 ]，分离胶 10 (以pH8．8的Tris～HC1为缓冲 源条件，针对其基础研究相对薄弱 的现状 ，在前期对 溶液)，浓缩胶 5 (以pH6．8的Tris—HCI为缓冲 黄花苜蓿种质材料群体提取种子贮藏蛋白进行种子 溶液)，电极缓冲液为 pH8．3的Tris一甘氨酸。电 蛋白图谱研究的基础上 ¨7]，采用牧草种质资源育种研 泳仪为 DYY一8B型电泳仪 ，以40mA稳流进行