南方根结线虫诱导辣椒基因CaRKNIF2 的克隆与分析.pdfVIP

中国农业科学 2010,43(24):5046-5054 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2010.24.008 南方根结线虫诱导辣椒基因 CaRKNIF2 的克隆与分析 1,2 1 2 2 2 郑井元 ，邹学校 ，茆振川 ，陈国华 ，谢丙炎 1 2 （中南大学研究生院隆平分院，长沙 410125 ； 中国农业科学院蔬菜花卉研究所，北京 100081 ） 摘要：【目的】明确辣椒（ Capsicum annuum L. HDA149）中与南方根结线虫（Meloidogyne incognita ）不 亲和互作过程中抗性相关WRKY 转录因子的基因结构及其表达模式。【方法】采用RACE结合RT-PCR方法克隆cDNA 序列，并根据 cDNA 序列设计特异引物扩增 DNA 序列，Southern 杂交确定基因拷贝数，实时荧光定量 PCR 方法分 析该基因在线虫侵染后辣椒的不同组织和不同时间点的表达。【结果】从辣椒中克隆到一个WRKY 转录因子基因 CaRKNIF2 （GenBank登录号：GQ253367），该基因编码区全长1 662 bp，编码553个推定的氨基酸，为单拷贝基因。 CaRKNIF2 基因编码区全长DNA序列2 530 bp，包含5个内含子和6个外显子。在线虫接种诱导处理时，该基因表 达具有组织特异性，根尖组织中的表达量最高；接种3 h后在根尖组织中的表达量开始升高，12 h最高，此时相 对表达量约为 3.1 倍。【结论】 CaRKNIF2 在线虫接种处理后的表达上调，表明该基因参与了抗性基因 Me3 介导的 辣椒与根结线虫的不亲和互作，可能在此过程中具有重要功能。 关键词：WRKY 转录因子；CaRKNIF2；cDNA；Southern杂交；基因表达 Cloning and Analysis of Gene CaRKNIF2 Isolated from Capsicum annuum Induced by Meloigogyne incognita 1,2 1 2 2 2 ZHENG Jing-yuan , ZOU Xue-xiao , MAO Zhen-chuan , CHEN Guo-hua , XIE Bing-yan 1 2 ( Branch of Longping, Graduate School of Central South University, Changsha 410125; Institute of Vegetables and Flowers, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100081) Abstract ：【Objective 】 The aim of the study was to clarify the characterization and expression of one WRKY transcription fac