食源致病菌96微孔板DNA诊断芯片研制及在一起食物中毒.pdfVIP

2010;30(3)%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%% 南方医科大学学报(J%South%Med%Univ) · 417 · 食源致病菌96 微孔板DNA 诊断芯片的研制及在一起食物中毒突发事件 中的应用 1 2 1 1 1 1 1 1 1 1 3 1 1 莫秋华 ，李 强 ，林继灿 ，谭 华 ，涂承宁 ，叶立青 ，刘志明 ，杜 坚 ，孙 虹 ，李书香 ，王献煌 ，杨 泽 （ 2 3 海出入境检验检疫局，广东珠海519020 ； 南方医科大学南方医院检验科，广东广州510515 ； 晶宇生物科技实 业股份有限公司，台湾苗栗县 ） 350 摘要：目的 研制能同时检测 种常见食源致病菌的 微孔板 诊断芯片。 方法 针对金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、 9 96 DNA 大肠杆菌O157:H7(Stx1 和 Stx2)、志贺氏菌、产单核细胞李斯特菌、蜡样芽胞杆菌、小肠结肠炎耶尔森菌、副溶血弧菌、 霍乱弧菌等 种最常见的食源性致病菌，首先选择合适的保守基因，设计种特异性的 引物（ 端标记生物素）和检 9 PCR 5 测探针，通过参数优化建立一管多重 扩增体系；然后按 的阵列格式将探针点制到 微孔板的微孔内，通过条 PCR 5×5 96 件优化建立稳定的 PCR 产物与固化探针的微孔杂交体系； 采用链霉抗生物素蛋白碱性磷酸酶和化学显色底物 来检测特异性的 杂交产物。 结果 株标准菌株验证已建立的食源致病菌微孔板 诊断芯片，获 NBT/BCIP PCR 20 DNA 得比较特异和稳定的实验结果。 在一起食物中毒事件中，该芯片在采样后 12%h 内检出金黄色葡萄球菌，与传统的细菌 分离培养和生化鉴定的结果相符。 结论本研究建立的新型食源致病菌 微孔板 诊断芯片具有快速、 准确、 自 96 DNA 动化和高通量等特点，为快速应对食物中毒等突发公共卫生事件提供了非常有价值的检测技术。 关键词：食源致病菌； 微孔板芯片； 检测；食物中毒 96 DNA 中图