肿瘤细胞DNA样品基于二次谐波发生（SHG）的非线性光谱.pdfVIP

第32卷，第3期 2O 1 and March，2012 2年3月 SpectroscopySpectralAnalysis 罗冬梅1，邓小元1，卓双木2，谭淑雯1，庄正飞1，金鹰¨ 1．华南师范大学生物光子学研究院，广东广州510631 2．福建师范大学医学光电科学与技术重点实验室，福建福州350007 摘要二次谐波的产生是一个二阶非线性光学过程，这个过程只发生在中心对称系数不为零的非中心对 称区域。利用二次谐波显微技术可以对各种具有内源性信号的生物组织进行无损伤实时成像，如结缔组织 的胶原纤维或肌细胞的肌动球蛋白。在生物化学和结构生物学中。虽然DNA是由脱氧核糖核苷酸构成而蛋 白质是由氨基酸残基组成，但是DNA和蛋白质大分子高级结构的形成机制是相似的。利用光谱学成像技术 对不同DNA样品进行检测，获取I)NA样品的sHG信号并进行高解析度成像。这些DNA样品包括基因组 DNA溶液、细胞核提取物以及培养细胞的细胞核。实验结果表明在常规条件下可以获得基因组DNA溶液 和细胞核提取物的sHG信号，但几乎观测不到来自培养细胞核区的SHG信号。通过在培养基中添加少量 无水乙醇(体积比小于5％)，可以在培养细胞的细胞核区域检测到SHG信号。推测在培养细胞中乙醇和 DNA相互作用引起DNA分子构象发生变化，这些变化可能导致了DNA分子非线性光学性质的改变。 关键词 二次谐波发生；基因组DNA；细胞核提取物；培养肿瘤细胞；乙醇 中图分类号：()433；Q523文献标识码：A DOI：lo．3964／j．iSSrLlooO-0593《2012J03-0800∞5 外加分子探针即可产生较强的SHG信号，可消除染料致毒 引 言 的影响。同时，二次谐波显微镜不受前向发射性质的限制， 可以两个方向收集信号，因此很容易与TPⅡ和()CT excitednuorescence coherence 双光子激发荧光成像(two-photon (optical tomography)等联合使用，进行成像比较， imaging，TPEF)[13是20世纪90年代发展起来的一种非线性实现信号互补。SHG和TPEF的激发强度与激发光的平方 显微成像技术，它是基于细胞或生物组织中荧光团对两个光 成正比，两种显微方法的卒问分辨率相当，意味着能够从同 子的同时吸收然后再发射的成像过程。由于双光子激发只发 一装置上得到这两种信号的对照模式，除了使用不同的滤光 生在焦点附近的极小区域，故无需共焦小孔(∞n№l 片外，二次谐波显微成像和双光子激发荧光显微成像在系统 结构上完全兼容。近年来，二次谐波一双光子(SHGTPEF)联 pinhole)即叮实现三维高分辨成像，可降低在光学成像中的 荧光漂白效应，减少光化学毒性。其成像叮采用近红外的超 合成像技术已经被广泛应用于生物组织和细胞的研究[351。 快激光作为光源，组织吸收和散射效应小，具有成像深度 二次谐波技术很早就被应用于生物组织成像[6|。其后， 深、对生物体损伤小、分辨率高等优点。 在多种生物组织中都可检测到SHG信号，如角膜[引、鼠尾 虽然TPEF成像具有一系列优点，但它仍不能消除焦点 内生物组织的光漂白和光损伤。近年来发展起来的二次谐波 子如核酸(DNA或RNA)、蛋白质、糖元、淀粉、纤维素、磷 (secondhamonic generation，SHG)L21成像技术克服了这一 脂等都具有手性，而它们的单体如核苷酸、氨基酸等，也都 缺点，它利用超快激