卡那霉素在白三叶遗传转化筛选中应用研究.pdfVIP

深 圳 职 业 技 术 学 院 学 报 2009 年第 5 期 Journal of Shenzhen Polytechnic No.5, 2009 卡那霉素在白三叶遗传转化筛选中 的应用研究 * 王 丹，雷江丽 （深圳市园林科学研究所，广东 深圳 518003） 摘 要：为了探讨白三叶遗传转化中最佳的卡那霉素筛选体系，将白三叶种子置于不同浓度的卡那霉素溶 液中，处理不同时间．结果表明：卡那霉素对白三叶种子的发芽率和发芽势没有显著影响，但对主根的生长和 侧根的形成有显著的抑制作用．结合根系生长、叶色、植株长势等指标，确定卡那霉素处理白三叶种子的最佳 浓度为 50 mg/L ，最佳处理时间为 6-8d． 关键词：白三叶；卡那霉素；筛选 中图分类号：S541.2 ；S688.4 文献标识码：A 文章编号：1672-0318 （2009 ）05-0063-05 卡那霉素是目前遗传转化报道中应用较多的 1 材料与方法 一种抗生素，可以对以 npt- Ⅱ为筛选基因的农杆 菌遗传转化体进行筛选．其毒性机理是与植物细 1.1 植物材料 胞器叶绿体和线粒体中的核糖体 30S 亚基结合， 白三叶品种“海发 （haifa ）”由深圳市鑫淼森园 从而阻止翻译过程，干扰蛋白质合成，导致植物 林草坪有限公司提供． [1] 细胞死亡 ．转化植株因整合了 npt- Ⅱ基因，在 1.2 细菌和质粒 进行卡那霉素培养时，对其产生抗性而正常生长， 农杆菌菌株 LBA4404，含质粒 pBI121 ，携带 [2] 未转化植株则因无 npt- Ⅱ基因而死亡 ．应用卡 npt- Ⅱ基因． 那霉素筛选以 npt- Ⅱ基因作为筛选基因的外源 1.3 卡那霉素对种子的处理方法 [3] 基因遗传转化操作已成功地应用于芥菜 、番茄 取饱满成熟的种子，用 70%乙醇振荡表面消毒 [4] [1] [5] [6] [7] [8] 、菊花 、大豆 、芜箐 、小麦 、红薯 、 2min ，然后用 1.5%的次氯酸钠灭菌 5min，用无菌 [9] 白菜 等多种植物．然而不同的物种之间遗传背 水清洗，将消毒后的种子置于铺有滤纸的培养皿中， 景不同，同一物种的不同转化受体等都导致对抗 在皿中加入卡那霉素溶液，26 ℃，14h/d 光照的人 生素的耐受性存在差异．对转化体进行筛选，建 工气候箱中培养．每天更换新鲜的卡那霉素溶液．卡 立一套高效快速、简便、精确的筛选体系是转基 那霉素浓度设 0，25 ，50，75，100，125，150，175， 因成功的关键步骤． 200mg/L 共9 个处理，每处理50 粒种子，3 次重复．于 本文研究不同发育时期的白三叶草对卡那霉