悬铃木遗传转化过程中选择压力确定3.pdfVIP

第 26 卷 第 1 期 华 　中　农 　业 　大 　学 　学 　报 Vol . 26 　No . 1 2007 年 　2 月 J ournal of Huazhong A gricult ural U niver sit y Feb . 2007 ,102～106 悬铃木遗传转化过程中选择压力的确定 刘国锋 包满珠 　李志能 (华中农业大学 园艺植物生物学教育部重点实验室/ 华中农业大学园艺林学学院 ,武汉 430070) ( ) 摘要 　以二球悬铃木 P l at anus ace rif ol i a 的下胚轴和离体叶片为材料 ,研究了植物遗传转化过程中常用 ( ) ( ) 的2 种选择剂卡那霉素 Kan 和除草剂 PP T 对其不定芽分化的抑制作用 , 同时试验了 2 种选择剂对试管苗生 根的影响 。结果表明 , Kan 和 P P T 对悬铃木下胚轴和离体叶片的不定芽分化及试管苗生根均表现出较强的抑 制作用 ,其中 12 . 5～20 . 0 mg/ L Kan 或 2 . 0 mg/ L PP T 能完全抑制叶片外植体正常的不定芽分化 ,50 mg/ L Kan 或 1. 0 mg/ L P P T 可完全抑制下胚轴的不定芽分化 ; Kan 和 P P T 抑制试管苗生根的选择浓度分别为 50 mg/ L 和 4 . 0 mg/ L 。试验确定了以悬铃木的下胚轴和叶片为转化受体时不同筛选阶段 Kan 和 PP T 的选择压力 ,为其 基因工程改良奠定了基础 。 关键词 　悬铃木 ; 卡那霉素 ; 草丁膦 ; 叶片再生 ; 遗传转化 + ( ) 中图法分类号 　S 792 . 37 ; S 722 . 3 7 　　文献标识码 　A 　　文章编号 　1000242 1 2007 0 10 10205 ( ) 　　二球悬铃木 P l at an us acerif ol i a 又称悬铃 择标记基因主要有 N P T I I 、H P T 、B a r 等 ,分别采 ( ) ( ) 木 、英国梧桐 ,生长迅速 、冠大荫浓 、干皮光洁 、耐修 用卡那霉素 Kanamycin 、潮霉素 Hygro mycin B 剪 、易繁殖 ,且具有较强的环境适应性和抗污染能 和 P P T ( Pho sp hinot hricin) 进行转化体的筛选 。然 力 ,因而是全球范围内广泛应用的园林树种 ,享有 而 ,不同植物种类 、品种甚至不同的外植体类型对选 “行道树之王”的美誉[ 1 ] 。在我国一些夏季高温的大 择剂的敏感程度存在很大的差异[ 8 ] , 因此对不同的 中城市 ,悬铃木作为行道树和庭荫树 , 已成为一种其 受体系统进行转化时都得事先确定相应选择剂的有 他树种无法替代的园林植物 ,在城市绿化和园林建 ( ) 效选择浓度 压力 。为了顺利进行悬铃木的基因工 设中起着十分重要的作用 。然而 ,美中不足之处在 程改良,特别是为将 B a rnas e 、