HBx诱导p16（INK4a）高甲基化在Chang细胞株恶性转化倾向中的作用.pdfVIP

北 京 大 学 学 报 ( 医 学 版 ) · 932 · JOURNALOFPEKINGUNIVERSITY(HEALTHSCIENCES) Vo1．44 No．6 Dec．2012 · 论 著 · HBx诱导p16 高甲基化在 Chang细胞株恶性 转化倾向中的作用 吕文平 ，周开伦 ，高 彬 ，陈永亮 ，向 昕 ， 苏 明。，董家鸿 (1．中国人民解放军总医院海南分院肝胆外科 ，三亚 572013；2．海南省人民医院肝胆外科 ，海 口 571100) [摘 要]目的：探讨乙型肝炎病毒X(HBx)蛋白对p16 表达和甲基化的影响，以及其在肝细胞癌早期发生中的 作用机制。方法：采用脂质体法将真核表达载体pcDNA3．1B—HBx和pcDNA3．1B质粒分别稳定转染Chang细胞，构 建表达HBx的细胞株Chang—HBx和不表达 HBx的细胞株 Chang—vector；半定量 RT—PCR和Westernblot法分别在 mRNA和蛋 白质水平上检测 Chang—HBx、Chang—vector和 Chang细胞株 中的p16 表达；甲基化特异性 PCR检测 HBx对细胞中p16 启动子甲基化的影响；CCK．8溶剂检测3种细胞株的增殖曲线，流式细胞仪观察 3种细胞的 细胞周期和细胞凋亡率，重复3次。结果：成功构建了Chang—HBx和Chang—vector稳定细胞株 ，Chang—HBx细胞生长 速度增快，Chang—HBx细胞的S期平均 比率明显高于Chang—vector细胞和Chang细胞 (28．96％ ．21．53％，P 0．001；28．96％眠 21．5％，P0．001)，而且 Chang—HBx细胞的细胞凋亡率平均值明显低于Chang—vector细胞和 Chang细胞(2．71％ 3．69％，P0．001；2．71％us．3．36％，P0．001)。初步机制研究证实HBx蛋白介导肝 细胞的p16 高甲基化，进而导致p16 在mRNA和蛋白水平上表达均下降。结论：HBx通过诱导 p16 高甲 基化下调后者的表达水平 ，可能在Chang细胞的恶性转化倾向中发挥作用。 [关键词]癌，肝细胞 ；乙型肝炎病毒x蛋白；基因，p16；甲基化 [中图分类号]R735．7 [文献标志码]A [文章编号]1671—167X(2012)06-0932-05 doi：10．3969／j．issn．1671—167X．2012．06．026 HepatitisB virusX protein inducesmalignanttransformation tendency ofChang livercellsinvolvingp16 hypermethylation LV Wen—ping’ ZHOU Kai—lun ．GAOBin，CHEN Yong．1iang ，XIANG Xin ，SUMing ，DONG Jia．hong ， (1．DepartmentofHepatobilliarvSurgery，HainanBranchofChinesePeople’sLiberationArmyGeneralHospita1，Sanya 572013，China：2．DepartmentofHepatobilliarySurgery，Hainna ProvincePeople’sHospital。Haikou571100，China) ABSTRACT Objective：TostudytherelationshipbetweenhepatitisBvirusX (HBx)proteinandDNA methylationofp16“ andtheroleofHBxinthecarcinogenesisofhepatocellularcarcinoma．M ethods： EukaryonicexpressionvectorspcDNA3．1B．HBxandpcDNA3．1BweretransducedintoChanglivercells byusingLipofectamine2000toestablishtheChang．HBxlivercellline (HBxexpr