生长素结合蛋白与纤维素合成酶在同一细胞中的标记与定位.pdfVIP

第38卷第6期 湖南农业大学学报 (自然科学版) V_o1-38No．6 2012年 12月 JournalofHunanAgriculturalUniversity(NaturalSciences) Dec．2012 D0I：10．3724／SP．J．1238．2012．00602 生长素结合蛋白与纤维素合成酶 在同一细胞中的标记与定位 陈宗星，刘晓柱，黄妤，黄丽华 ，张学文 (湖南农业大学 生物科学技术学院，湖南 长沙410128) 摘 要：生长素通过其结合蛋~(ABP1)促进细胞纤维素合成并使细胞伸长生长。为探明ABP1与纤维素合成酶 (CesA1)这2种蛋白质之间的相互关系，分别对这2种蛋白质进行了荧光标记，构建了绿色荧光蛋白(GFP)对 ABP1 融合标记以及青色荧光蛋白(cFP)对CesA1融合标记的2种载体。采用烟草叶片侵注法，将2种重组体转入烟草 叶片同一细胞进行瞬时表达。扫描激光共聚焦显微成像观察到转基因瞬时表达的烟草铺列细胞的细胞膜上有强烈 两色荧光信号，表明这2种蛋白集中在细胞膜上分布，其分布区域存在明显的重叠。在细胞的内膜系统中绿色荧 光信号相对较强，青色荧光信号较弱，表明内膜系统中也分布着一定量的ABP1，而纤维素合成酶在内膜系统中 不会集中分布。在叶片铺列细胞问嵌合交错区可以观察到青色荧光的高亮点，表明此处存在纤维素合成酶的高密 度分布，也说明在此部位有更多的纤维素合成。 关 键 词：生长素结合蛋白；纤维素合成酶；荧光标记；细胞定位 中图分类号：Q71 文献标志码：A 文章编号：1007—1032(2012)06—0602—05 LabelingandlocationofABP1andCesA1inthesametobaccoplantcell CHEN Zong．xing，LIU Xiao．zhu，HUANG Yu，HUANG Li—hua，ZHANG Xue—wen (CollegeofBioscienceandBiotechnology,HunanAgriculturalUniversity,Changsha410128，China) Abstract：Theauxinbindingprotein(ABP1)isinvolvedintheresponsetoauxinsignaltoinducetheelongationofplant cel1．InordertounderstandtheinteractionbetweenABP1andCesA 1，wt ochimeraexpressionvectorsareconstructedto labelABP1withGFPandCesA 1withCFPrespectively．Tworecombinantsaretransformedintotobaccoleaffortransient expression in the sameepidermalcellviainfiltration．Greenandcyan florescentsignalsareobserved in the same pavementcellsoftheinfiltratedleafregionbyconfocalmicroscopeanalysis，indicatingproteinsABP1andCesA1are accumulatedandoverlayingdistributedinthecellmembranes．Butintheendomembranes，thegreensignalsarestrong whilethecyansignalsareweek，demonstratingthatitisABP1butnotCesA 1whichisalsocollectivelydistributedinthe endomembranessystem．Cyan florescentsignalsareobserved in interdigitat