大鼠海马神经元PKCε特异性shRNA对神经元突起生长的影响.pdfVIP

解剖学研究 2011年第 33卷第 3期 AnatRes，2011，Vo1．33。N0．3 I6l · 论 著 · 大鼠海马神经元PKCe特异性 shRNA对神经元 突起生长的影响 李秀博， 田 琪 ， 张吉凤， 陈 元 (中山大学中山医学院神经生物学研究中心，广东广州 510080) 摘【要】 目的 构建shRNA特异性干扰海马神经元内PKCe，研究PKCe干扰后海马神经元突起长度的变化。方法 设计并构建 PKCe的小分子干扰 shRNA载体。分别在 293T细胞中共转染 PKCs和各干扰片段 ，Westernblot验证干扰效 果。将有干扰作用的载体转染海马神经元 ，用细胞免疫荧光法验证干扰内源PKCs的效果。激光共聚焦显微镜观察并统计 海马神经元突起生长的变化。结果 海马神经元内部 PKCs被干扰。干扰发生24h后海马神经元突起的长度与scvamble 对照相比，差异有统计学意义 (P=0．02)、48h后二者的差异无统计学意义 (P=0．343)。结论 海马神经元内PKCe被成功 f扰 ，干扰后PKCe对神经元突起生长有抑制作用。 【关键词l 发夹 RNA； 海马神经元； 蛋白激酶C； 神经突起长度 ThespecificshRNAtoPKCeinhippocampusneuroninfluencethegrowthofneutrite LIXiu—bo，TIANQi，ZHANG -feng， CHENYuan．ResearchCenterforNeurobiology，ZhongshanSchoolofMedicine，SunYea—senUniversity，Guangzhou510080， China A【bstract】 Objective ToconstructthespecificshorthairpinRNA(shRNA)tointerferePKCsinhippocampusneuron， thensurveythechange ofneutritelength． Methods Fourshort haiprin RNA vectorspredicted tohave theinterferenceeffect were designed and constructed． Western blotmethod wasused toselectthe strongestinterference shRNA after48 hours CO— expression with PKCsexpression vectorin HEK293 cells． Then the laserscanning eonfocalmicroscope observed the neutrite change． Results ThePKCs in hippocampusneuronhasbeeninterfered． After24 hourstrasfteetion oftheshRNA tranfection intoneuron， the neutritelength becameshorterthan theneuronwhichwastranfected with scramblecontrolshRNA． 48hours later，therewerenostatisticalsignificancebetweenthosetwogroups．Conclusion PKCsinhippocampusneuronwasinterfered successfully．TheknockdownofPKCs inhibitthegrowthofneutrite． K【eywords】 shRNA； Hippocampusneuron；ProteinkinaseC； Neutritelength PKCs是蛋 白激酶 C(proteinkinaseC，PKC)的 细胞瘤突起的生长[m]，由于针对 PKCs特异抑制剂 新亚型之一，主要分布在脑组织神经细胞内…。目 的缺乏I11]，PKCs特异的减少对神