宫颈癌细胞系RASSFIA基因启动子及第1外显子区甲基化状态的研究.pdfVIP

中国癌症杂志 2013年第23卷第10期 《 》 CHINA ONCOLOGY 2013 Vol.23 No.10 777 宫颈癌细胞系RASSFIA基因启动子 及第1外显子区甲基化状态的研究 1 1 1,2 1 1 1 汪姗姗 　王宁 　于啸 　杨晨曦 　闫丽萍 　王言奎 　 1. 青岛大学医学院附属医院妇产科，山东 青岛 266003 ； 2. 青岛市妇女儿童医疗保健中心妇产科，山东 青岛 266011 　　［摘要］　背景与目的：抑癌基因Ras相关区域家族1A (Ras association domain family 1A，RASSF1A) 启动子及第1外显子区CG位点高甲基化导致该基因沉默与多种恶性肿瘤的发生发展相关。本研究旨在探讨宫 颈癌细胞系RASSFIA基因启动子及第1外显子区甲基化状态以及甲基化转移酶抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷 µ (5-Aza-2’deoxycytidine，5-Aza-dc)作用对RASSFIA基因表达的影响。方法：采用5 mol/L(低浓度)和 µ 10 mol/L(高浓度)的5-Aza-dc作用于HeLa、Caski、HT-3以及C-33A等4种宫颈癌细胞系，分别采用甲基化特 异PCR (methylation-specific PCR，MSP)和亚硫酸盐基因组测序法(bisulfite genome sequencing，BGS)检 测5-Aza-dc处理前后RASSF1A基因启动子及第1外显子区甲基化状态，RT-PCR检测干预前后RASSF1A基因mRNA的 转录表达。结果：HeLa和Caski两种HPV阳性细胞系RASSF1A基因启动子及第1外显子区均呈低甲基化状态，mRNA F P F 表达阳性。低浓度和高浓度5-Aza-dc作用后，mRNA表达未见明显改变( HeLa=3.003， =0.125； Caski=0.045， P=0.956)。HT-3和C-33A两种HPV阴性宫颈癌细胞系RASSF1A基因启动子及第1外显子区则表现为高度甲基化状 态，mRNA表达受到抑制。低浓度和高浓度5-Aza-dc作用后，HT-3和C-33A细胞系RASSF1A基因启动子及第1外显 子区CG位点甲基化程度降低，检测到其mRNA表达，高浓度5-Aza-dc作用组表达水平明显高于低浓度组和细胞对 照组(F P F P t P HT-3=18.002， =0.03； C-33A=17.179， =0.03)，LSD- 检验显示差异有统计学意义( 0.05)。结论：HPV 阳性和HPV阴性宫颈癌细胞系中RASSFIA基因启动子及第1外显子区甲基化状态不同；RASSF1A基因启动子及第1 外显子区的高甲基化可抑制该基因表达；5-Aza-dc处理可使RASSF1A基因启动子及第1外显子区去甲基化，重新 激活基因的表达，这种作用在一定范围内有剂量依赖性。 　　［关键词］　Ras相关区域家族1A基因；人宫颈癌细胞系；5-氮杂-2’-脱氧胞苷；DNA甲基化；TA克隆 　　DOI: 10.3969/j.issn.1007-3969.2013.10.001 　　中图分类号：R737.33　　文献标志码