转移巴西橡胶树HbCBF1基因提高烟草抗寒能力的研究.pdfVIP

第 31卷 第 9期 热 带 作 物 学 报 VoI．31 No．9 2010年 9月 CHINESE JOURNAL OFTROPICAL CROPS Sep．2010 转移巴西橡胶树HbCBF1基因提高 烟草抗寒能力的研究 程 汉 ，安泽伟 ，蔡海滨 ，高 静 ，黄华孙 中国热带农业科学院橡胶研究所 海南儋州 571737 摘要 通过农杆菌介导的叶盘转化法将 巴西橡胶树 HbCBF1基 因导人到烟草 中增强表达 GUS染色和 PCR鉴定 结果表 明．外源 DNA片段 已成功导入并整合到烟草基 因组 中。选取 3个烟草转基 因株系用于进一步鉴定分析 ， 分析表 明，转化植株游离脯氨酸含量与对照相 比，分别上升 了4-2倍 、3．1倍和 2．5倍 ，叶绿素A和叶绿素 B含 量也 明显提高．．电导率法测定转化烟草的相对存活率分别为 19．8％、17．5 、l6_3 ，高于对照植株 的7．7％。 以上结果表 明．橡胶树 HbCBF1基因能够增强非低温驯化植物烟草 的抗寒能力 ．其机理可能是通过促进细胞内 容物的积 累从而提高细胞的低温防御 能力 关键词 巴西橡胶树 ：烟草 ；HbCBF1基因；抗寒 doi 10．39690．issn．1000-2561．2010．09．001 中图分类号 078$332．5 植物在低温胁迫下会产生一系列 的生理变化 ，如合成 ABAm，增加多糖 、脯氨酸3_【含量 以及提高花青 素合成 等 ．帮助植物度过不 良环境。在植物低温防御 中，基因表达调控是产生这些生理变化的基础 ．主 要包括一大类转录因子和下游功能基因被激活．从而启动植物的低温反应机制 其 中较为著名的是 CBF 信号通路5[-7]。CBF信号通路是指 以CBF转录激活因子为核心的信号传导途径，植物通过该信号途径能够 感知低温信号 ，通过磷酸激酶系统激活上游转录因子 。进而启动下游功能基 因COR(ColdResponsive)的 表达l5一，从而起到保护植物细胞膜系统 ，或通过其他方式提高植物细胞 的抗冻能力 。CBF转录激活因子 是指能够结合 CRT／DRE核心元件 的一类转 录 因子 ，CRrr／DRE元 件 (C—repeat／Dehydrationresponsive ele1TIent)是以CCGAC为核心序列的一类顺式作用元件 ．存在于 COR等功能基因家族 的启动子上 CBF基 因能够在低温诱导下迅速表达 ．并结合到 CRT／DRE元件上 ，从而启动 COR等下游功能基因的表达8[]。 橡胶树是热带起源的高大乔木 ．对低温十分敏感 ．在气温低于 1O℃时往往受到不同程度的寒害。中国 植胶区位于热带北缘 18~附近 ．经常受到低温寒潮的影响。如2008年初的寒潮造成 了大面积树木枯死 ，给 中国植胶业带来了重大损失。因此 ，在橡胶树 中开展抗寒生理研究，并培育、筛选橡胶树抗寒种植材料具 有重要的现实意义 笔者在之前的研究中已从橡胶树中克隆了CBF家族基因 日6 -t9[]．并在体外实验中初 步验证该基因编码的蛋 白质具有 DRE／CRT元件结合活性 。本文中．笔者将 HbCBFI基因转入到烟草中． 提高转基因烟草游离脯氨酸和叶绿素含量 。并通过电导率法测定转基 因烟草具有较高的抗寒能力 。 1 材料和方法 1。1 材料 烟草 K326为栽培品种。植物双元表达载体pCAMBIA2301、pBI121，农杆菌菌株 GV3101(pMP90)，大肠 杆菌菌株DH5cx均保存于中国热带农业科学院橡胶研究所遗传育种研究室。限制性内切酶购 自MBI公司。 基金项 目：国家科技支撑计划 “高产速生 巾抗橡胶树种质创新和新品种选育项 目(2006—2010)”、 “国家天然橡胶产业技术体系”资助。 第一作者简介 ：程 汉 ，男 ．1978年生 ，助理研究员 ，研究方 向：植物遗传育种 。Tel：0898 通讯作者，黄华孙 。E—mail：forcheng@gmail．COlll 收稿 日期 ：2010—07—01 修 回 日期 ：2010—09—06 热 带 作 物 学 报