甘草多糖提取过程中除蛋白方法的比较研究开题报告.docVIP

开题报告 　　 1 选题的背景和意义 (Glycyrrhiza)是多年生草本植物，属豆科甘草属。作为中药甘草指的是甘草属部分植物的根及根茎。我国作为药用而收载的甘草主要有乌拉尔甘草(Glycyrrhiza uralensis Fisch．)、胀果甘草(Glycyrrhizainflata Batal)和光果甘草(aycyrrhiza glabra L)。甘草是一味应用极其广泛的中药，这与甘草中的有效成分有关。 广泛存在于各种动植物和微生物组织中的多糖，是由各种单糖组成的天然高分子化合物。除典型的纤维素和几丁质外，各种类型的纤维素、果胶、粘液质都具有结构多糖的功能。从二十世纪六十年代后，多糖所具有的各种生理功能逐渐为人们所重视，尤其是增强免疫力的功能被广泛认同，并被广泛应用于肿瘤化疗等。目前世界各国，尤其是美国、日本等发达国家正投入大量人力、财力对各种动植物、微生物多糖进行深入研究。但天然植物中多糖与蛋白质两种高分子成分共存，且两种物质分子量相近，另外糖常常与蛋白形成糖蛋白复合物，使蛋白质的脱除变得更加困难。但也许正是由于结合了这部分蛋白质，多糖才具有众多独特的生理功能。 另据报道甘草中的多糖有降血糖、抑瘤作用等多种功能：可是在提取甘草多糖时，提取物中蛋白质含量很高，这对纯化带来了很大困难。本文针对甘草多糖水提物中蛋白质含量高这一情况，对几种甘草多糖脱蛋白方法进行了对比研究，以确定最佳脱蛋白。 2 相关研究的最新成果及动态 ^达到保护细胞作用，还可影响腺病毒和柯萨奇病毒的吸附及进入细胞的功能，达到保护细胞作用。其保护率分别为74.9%和59.0%因此可认为GPS可吸附于细胞表面或进入细胞内，以防止病毒的吸附和进入，可适用于预防病毒感染和治疗。 另外，李晓冰; 何小鹃等建立H22荷瘤小鼠模型,观察甘草多糖对模型小鼠脾脏调节性T细胞及脾淋巴细胞转化率的影响,探讨甘草多糖的免疫调节机制结果:模型组小鼠Treg细胞比例明显高于正常组,甘草多糖组Treg细胞比例低于模型组(P0.01),甘草多糖组脾淋巴细胞转化率明显高于环磷酰胺组。甘草多糖与环磷酰胺无交互作用。结论:甘草多糖可能通过降低荷瘤小鼠Treg细胞的比例及提高脾淋巴细胞转化率而发挥抗肿瘤免疫调节作用。 陆清儿; 童朝明等研究了甘草多糖的广泛用途及抑菌效果试验方法与试验过程。 结果表明:甘草多糖成品对大肠杆菌的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)均为16万mg/L;对金黄色葡萄球菌的MIC和MBC均为10万mg/L;其纯品对大肠杆菌的MIC和MBC均为4万mg/L、对金黄葡萄球菌的MIC和MBC均为2万mg/L;纯品对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌圈分别为5mm和8mm 。程安玮; 金征宇等通过研究甘草多糖对小鼠腹腔巨噬细胞NO、iNOS的生成及iNOSmRNA表达的影响,结果表明:GP能剂量依赖性地增加活化的巨噬细胞中NO的生成量及iNOS的活性,当GP的添加浓度为400μg/ml时,NO、iNOS的分泌量和iNOSmRNA表达达到最大。固定GP添加量为100μg/ml,培养时间在48h时,NO、iNOS的分泌量和iNOSmRNA表达量最大。这表明GP刺激巨噬细胞NO合成的调节可发生在iNOS的转录水平,从而刺激巨噬细胞NO大量合成与释放,GP的免疫调节作用和抗肿瘤作用机制可能与GP刺激巨噬细胞iNOS从头合成从而增加NO生成有关。 3 课题的研究内容及拟采取的研究方法、研究难点及预期达到的目标 拟采取的→粉碎→超声波提取三次→过滤→滤液浓缩→乙醇沉淀→过滤得沉淀→无水乙醇，丙酮，乙醚分别洗涤三次→干燥→粗多糖产品 2、Sevag法: 取一定粗多糖热水溶解→过滤→定容一定体积→加入Sevag有机溶剂，震荡脱蛋白，重复多次操作→每次取一定体积上清液加95%的乙醇至含醇量达80%，离心，收集沉淀→依次用无水乙醇，丙酮，乙醚洗涤三次沉淀→干燥→Sevag法甘草多糖I，II，III。 3、胰蛋白酶法: 取一定粗多糖热水溶解→过滤→定容一定体积→加入胰蛋白酶脱蛋白，重复多次操作→灭酶→每次取一定体积上清液加95%的乙醇至含醇量达80%，离心，收集沉淀→依次用无水乙醇，丙酮，乙醚洗涤三次沉淀→干燥→胰蛋白酶法多糖I，II，III。 4、三氯乙酸法: 取一定粗多糖热水溶解→过滤→定容一定体积→加入40%三氯乙酸溶液脱蛋白，重复多次操作→每次取一定体积上清液加95%的乙醇至含醇量达80%，离心，收集沉淀→依次用无水乙醇，丙酮，乙醚洗涤三次沉淀→干燥→三氯乙酸法多糖I，II，III。 5、多糖含量测定采用苯酚－硫酸法，蛋白质测定采用考马斯亮兰法进行 3.3 研究难点 1、多糖和蛋白测定方法的稳定性不是很好，要求操作条件较苛刻； 2、提取粗多糖的前处理比较麻烦，处理不当可能影响蛋白去除