基于农杆菌介导瞬时转化法的AtGLR1.4亚细胞定位分析.pdfVIP

第 29卷第 2期 生 物 学 杂 志 Vo1．29 No．2 2012年 4月 JOURNALOFB10LOGY Apr，2012 doi：10．3969／j．issn．2095—1736．2012．02．051 基于农杆菌介导瞬时转化法的AtGLR1．4亚细胞定位分析 吴 晶，项显波 ，钱周婷 ，林威彦，朱世华，丁沃娜 (宁波大学科学技术学院，宁波 315211) 摘 要：将拟南芥基因AtGLR1．4启动子驱动的AtGLR1．4基因与绿色荧光蛋白(GFP)基因融合后 ，利用根瘤农杆菌 介导瞬时转化法 (FastAgro—mediatedSeedlingTransfomation，FAST)浸染拟南芥幼苗，对其进行亚细胞定位的研究。 转基因植株通过激光共聚焦扫描显微镜的观察，发现GFP绿色荧光在叶片表皮细胞的细胞膜上特异表达，表明At— GLR 1．4蛋 白定位于细胞质膜上 ，为其后续的功能研究提供 了线索。 关键词：拟南芥；AtGLR1．4；绿色荧光蛋 白；瞬时表达；亚细胞定位 中图分类号：Q943．2 文献标识码：A 文章编号：2095—1736(2012)02—0051—04 Subcellularlocalization analysisofAtGLR1．4by the fastagro·mediated seedlingtransformationmethod WUJing，XIANGXian—bo，QIANZhou—tin，LINWei—yan，ZHUShi—hua，DINGWo—na (CollegeofScienceandTechnology，NingboUniversity，Ningbo315000，China) Abstract：Inthisstudy，thenativepromoterofAtGLRI．4 wasutilizedtodrivetheexpressionofAtGLR1．4 fusedwitharepo~ gene GreenFluorescentProtein(GFP)andthenusedtotransientlytransformArabidopsisyoungseedlingsbythefastagro—mediatedseedling transformation(FAST)method．TheexpressionofGFPwouldindicatethesubcellularlo‘calizationofAtGLR1．4．Confocalmicroscopy analysisofthetransformedplantsshowedthattheGFP signalwasspecificallydetectedOiltheplasmamembraneofleafepidermalplas—- mamenlbraneofleafepidermalcells．ItsuggestedthatAtGLR1．4waslocate(1onplasmamembrane． Keywords：Arabidopsis；AtGLR1．4；GFP；transientexpression；subeellularlocalization 离子通道型谷氨酸受体 (ionotropieg]utamatere— 期等待拟南芥生长成熟，然后还 需收获种子并筛 ceptors，iGluRs)首先在动物中被发现，作为一类门控离 选 。瞬时基因表达是一种替代稳定转化 的方法 ，其 子通道 ，介导了多数的兴奋性神经传递…。高等植物 中根癌农杆菌介导的烟草叶片渗透法被广泛使用，因 如拟南芥 、水稻 、小萝 卜 、平邑甜茶 中也有编 为它操作简单而且转化效率很高 。。但在研究拟南 码类似受体基因的存在，在拟南芥中发现了有20个谷 芥基因时 ，烟草作为一个异源系统可能无法如实反映 氨酸受体基因(AtGLRs)家族，并分为3个