利用EcoTILLING简化技术进行水稻基因型鉴定及单核苷酸多态性（SNP）检测.pdfVIP

＼ ．． Onlinesystem：http：／w／ww．jabiotech．org 农避生钨按琳攀凇 农 业 生 物 技 术 学 报 —I脯●I麓— 圈舅 JournalofAgriculturalBiOtechnology 2012，2O(3)：254—260 ’跫 DOI：10．3969／j．issn．1674-7968．2012．03．004 研究报告 Le~er 利用 EcoTILLING简化技术进行水稻基因型鉴定及单核苷酸多态性 (SNP)检测 滕斌 李泽福 罗志祥 吴敬德 朱学桂 宣红 张瑛 安徽省农业科学院水稻研究所，合肥 230031 通讯作者，zhangying56888@sina．corn 摘 要 EcoTILLING(ecotypetargetinginducedlocallesionsingenomes)是一种高通量检测和分析 自然群体 中单核苷酸多态~(singlenucleotidepolymorphism，SNP)变异的研究方法。由于该技术需要高级、精密的仪 器设备和昂贵的荧光标记引物来检测CEL(celery)I的酶切产物，极大地限制了该技术的应用。本研究对传 统EcoTILLING技术做了适当改进，简化了CELI酶的抽提步骤，采用 自然冷却方法制备异源双链产物，普 通银染检测CELI酶切产物，酶活检测结果显示CELI粗提液对错配产物切割效果 良好。利用EcoTILLING 简化技术对 18份水稻(OryzasativaL．)品系Wx基因第 1内含子 5’端的G／T基因型进行了成功鉴定。此外， 对 18份水稻材料中一417bp长的Wx基因片段实现了CELI酶切条带分型，经测序验证，酶切带型差异能 够准确反映材料间SNP的变异。本研究结果表明，应用 EcoTILLING简化技术可有效进行水稻基因型鉴定 及SNP检测，是开展水稻功能基因组研究的有力工具。 关键词 EcoTILLING，CELI，水稻，基 因型，SNP Application ofSimplified Ecotype Targeting Induced LocalLesionsin Genomes(EcoTILLING)TechniqueforGenotypingandSingleNucleotide Polymorphism(SNP)DetectioninRice TENGBin LIZe—Fu LUOZhi-Xiang WU Jing-De ZHU Xue-Gui XUANHong ZHANGYing InstituteofRiceResearch，AnhuiAcademyofAgriculturalSciences，Hefei230031，China Correspondingauthor，zhangying56888@sina．corn Abstract Ecotypetargetinginducedlocallesionsingenomes (EcoTILL1NG)isahigh—throughputmethodof detectionandanalysisofsinglenucleotidepolymorphism (SNP)variationsinnaturalpopulations．However，it requiresasubstantialinvestmentinsophisticatedequipmentandcostlyfluorescencelabeledprimerstodetectCEL I—cutproductsthatlimititsuseinlaboratorieswithcommonfinancialresources．Thetechnologyoftraditional Ec