枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）过氧化氢酶的分离纯化及性质.pdfVIP

应用 与环境生物学报 2008．14f6l820～824 2008一l2—25 chinJApplEnvironBioi=JsSN loo6—687x DOI：l03724／SPJ．1l45．20O8．0O82O 枯草芽孢杆菌 c 过氧化氢酶 的分离纯化及性质冰 姚海勇-华兆哲，z料 堵国成，z陈坚， (江南大学 。牛物T程学院环境生物技术研究室，工业生物技术教育部重点实验窒 江苏无锡 2l4122) 摘 要 对产 自枯草芽孢杆菌 口c，， 6棚 wsHDz一01的过氧化氢酶，通过乙醇沉淀、DEAE阴离子交换层析、疏水 层析3步纯化，最终获得电泳纯的目标酶 (纯化6．8倍)．该过氧化氢酶的亚基相对分子质量 ()为63×10，在405nm处 示特征吸收峰，推测含有 红素．计算获得酶的表观米氏常数为26．87mmolL～．该过氧化氢酶不受低亚硫酸钠的还原 作用影响，但被氰化物、叠氮化物和3一氨基一1，2，4i唑(单功能过氧化氢酶的专一抑制剂)强烈抑制．以邻苯二胺作为电 子供体测定酶活时，该酶不 示过氧化物酶活性，因此本文将纯化的过氧化氢酶定性为单功能过氧化氢酶．此外，该 酶具有热敏感的特点，且酶活在pH5～l0范围内不受pH影响，此后，活性随着pH的升高而升高，并在pH 11～12处有明 显的酶活高峰，在pH 11、25℃放置60min酶活基本不变，表明该酶在高碱条件下具有很高的活力和一定的稳定性 ． 图5表2参19 关键词 枯草芽胞杆菌；过氧化氢酶；纯化 ；性质 CLC TO925．9：O939．106 Purificati0nandCharacterizatiOn0fCatalasefr0m c 髓 W SHDZ．01 YAOHaiyOng，HUA ZhaOzhe，”，DU GuOcheng， CHEN Jian， Lnb0rntory(Envir0nmentd!Botechnology．School0Bio把chHology．2KeyLnborntoryofjnd“slrin!Biotechnology．Min}SfryofEd“cd“on．Jidngnnn 己 P f wuxi214l22，Jiangsu，china) Abstract Acata1asetOm B cf，，甜 6f WSHDZ一01waspunfiedandcharactenzed．I。hepun6cat10nwasperf0rmedw1tha three—stepprocedureconsistingofethano1precipitation，[IEAEionexchangeandhydrophobicinteractionchromatography，and 6nal】yachieveda6．8一foldpuri6cationoverthecrudeextract．SDS—PAGEofthepurifiedcata1asereVea1edthefinalpresenceof asinglebandatanapparentmolecularmassof63×10．ThenatiVeenzymeshowedthetypica1Sortbandappearingat405nm， whichindicatesthatthepurifledcata1aseisaheme—containingenzyme．Theapparent，mValueforenzymeactiVityonH20， wascalculatedtobe26．87mmolL～．Theactivityofthiscatalasewasnotreducedbydithionite，butwasstronglyinhibited bycyanide，azideand3一