一种体外扩增γδT细胞的新方法.pdfVIP

吕小婷等 一种体外扩增 361细胞的新方法 第 8期 · 739 · doi：10．3969／j．issn．1000-484X．2011．08．014 一 种体外扩增 yST细胞的新方法① 吕小婷 刘军权 周忠海 陈 玲 张 娟 张 颂 黄 菲 陈复兴 (中国人民解放军第九七医院实验科，徐州 221004) 中国图书分类号 Ib92．9 文献标识码 A 文章编号 1000．4S4X(2011)08．0739．05 [摘 要] 目的：建立一种新的78T细胞扩增方法。方法：从健康人外周血中分离外周血单个核细胞(PBMCs)，与用唑来 膦酸预处理过的未成熟 DCs按 10：l混合，在含 IL-2400U／rnl和 10％小牛血清的RPMI1640培养基中培养，用 MTF法测定细胞 增殖倍数。用流式细胞仪对 78T细胞进行表型分析并检测其细胞内的颗粒酶B、穿孔素和 CD107a含量。用乳酸脱氢酶释放 法(LDH)检测细胞杀伤活性。结果：经唑来膦酸预处理的树突状细胞与 自身外周血单个核细胞共培养，到 11天时78T细胞增 殖倍数达到(120±15)倍，第 8天和 11天78T细胞百分率分别达到70．26％±3．56％、90．11％±4．67％。78T细胞细胞内颗粒 酶 B、穿孔素及 CD107a在第8天时分别为81．66％±4．32％、86．62％-4-5．21％和80．12％±3．78％，均高于对照组。培养的78I 细胞对 SGC一7901、SW一1990、SW-480肿瘤细胞株杀伤活性至第 8天时达到峰值。结论：此法能有效诱导 细胞体外扩增 ，培养 的76T细胞颗粒酶B、穿孔素及 CD107a均显著高于对照组，并有较强的抗肿瘤活性。 [关键词] 树突状细胞；唑来膦酸；781细胞；免疫治疗 A novelamplificationmethodofyST cells LUXiao—Ting， Jun—Q眦n，ZHOUZhong—Hal，CHEN ，ZHANGJuan，ZHANG 凡g，HUANGFei，CHENFu一 ． DepartmentofCentralLaboratory，the97thHospitalof ，Xuzhou221004，China lAbstractJ Objective：Toestablishanovelamplificationmethodof781cells．Methods：PBMCsofhealhtydonorswereCO—incubated withZoledronate—pretreatedautologousimmaturedendriticcellSbytheratioof10：1inRPMI1640completemedium contmning400U／mlIL-2 and10％ newborn bovineSeD_lnl，theamplificationfoldof78TcellsweredeterminedbyMTYassay．ThepurityandGranzymeB．Pefforinand CD107aexpressionof ceHswereverifiedbyflow cytometer．Th ecytotoxicactivityof cellswerean~yzedbyLDH assay．Results：Onthe 12htday，theamplificationofy6Tcellswere(120±15)folds，onthe8thdayandthe11thdaythepurityof78Tcellsreached70．26％± 3．56％ and90．11％ ±4．67％ respectively．Onthe8th dayGranzymeB，PefforinandCD107aexpressionof7bT cellswere81．66％ ± 4．32％ 、86．62％ ±5．21％ nad80．12％ ±3．78％ respectively．theyweresignificantlyhigherthanthecontmlgroup．Thecytotoxicityofex— panded763cellsagainstSGC一7901，SW一1990，SW-480cellsreachedthepeakonthe8thday．Conclusion： ，rcellamplificationcouldbee