以SecA为靶点的新型抗绿脓杆菌药物细胞水平筛选模型的建立和应用.pdfVIP

微生物学通报 DEC20，2008，35(12)：1926~1931 M icrobiology @ 2008byInstituteofM icrobiology．CAS tongbao@im ．ac．cn 以SecA为靶点的新型抗绿脓杆菌药物细胞 水平筛选模型的建立和应用 赵莉莉 李秋萍 魏玉珍 张玉琴 余利岩 (中国医学科学院 北京协和医学院医药生物技术研究所 北京 100050) 摘 要：Sec途径(即分泌途径 secretionpathway)是蛋 白质转运的主要途径。其中，最为关键的组 分之一是 SecAATP酶，是蛋 白质转运途径 中的 “动力泵”，通过 ATP的水解循环驱使蛋白质前体 穿过细菌内膜，在细菌中是不可缺少的。我们推测抑制 SecAATP酶活性的化合物，必然会在一定 程度上抑制蛋 白质的转运和分泌。通过绿脓杆菌与大肠杆菌SecA蛋 白的互补作用，利用本实验室 构建的高效表达SecA蛋 白的基因工程菌，建立了SecA蛋 白ATP酶活性抑制剂的细胞水平筛选模 型。利用所纯化的绿脓杆菌 SecA蛋白的ATP酶活测定体系，验证 了所建立的细胞水平筛选模型 具有一定的特异性。研究结果表明其中两个酯相组分在细胞水平和蛋 白水平均具有活性，值得进 行深入 的研究。 关键词：药物筛选，SecA蛋白，绿脓杆菌，蛋白转运 TheEstablishmentandApplicationofAnti--Pseudomonas aeruginosaCell-basedScreeningM odelTargetingtoSecA ZHAOLi—Li LIQiu—Ping WEIYu—Zhen ZHANGYu—Qin YULi—Yan (InstituteofMedicinalBiotechnology，ChineseAcademyofMedicalSciences＆PekingUnionMedicalCollege，BeOing100050) Abstract：ThemostofsecretedproteinsareexposedbySectranslocase(secretionpathway)．SecAATPase isoneofhtemostimportantsubunitintheSectranslocase．whichispreproteintranslocasenanomotorthat undergomembraneinseaionanddeinsertiontodrivepreproteinacrossthebacterialinnermembrane，nad SecA isindispensabletobacteria．Itshouldbepresumedthathtecompoundwhichinhibitshteactivityof SecA Paseprobablycanbeusedasthecandidateofbactericide A secAgenefrom Pseudomonasaerugi． nosaPAO1wasamplifiedandexpressedinEscherichiacolfBL21．19(secA131．Ithasbeenshownthatthe wild—typeSecAofPseudomonasaeruginosacouldfullycomplementtheE coliamber(secA13)mutantat thenon·permissivetemperature．SoacelllevelscreeningmodeltargetingonSecA wasestablishedbasedon theaboveresult．The inhibition ofPaSecA ATPaseactivitywasappliedtovalidatehtespecificityofthe cell。basedmethod．TwOpositivesamplesbasedonb