Real-time PCR法研究基质金属蛋白酶10在非小细胞肺癌中的表达.pdfVIP

· 1338 · 第2l卷 第 l2期 医学 研 究 生 学 报 Vo1．21 No．12 2008年 12月 JournalofMedicalPostgraduates Dec．2008 · 论 著 摘 要 · Real—timePCR法研究基质金属蛋白酶 10在 非小细胞肺癌中的表达 朱少伟 ， 罗光华 ， 张晓膺 ， 郑 璐 ，魏 江 ， 朱 江 (苏州大学附属第三医院，1．心胸外科；2．综合实验室，江苏苏州213003) 关键词： 非小细胞肺癌； 基质金属蛋白酶一10；Real—timePCR 中图分类号： R734．2 文献标识码： A 文章编号： 1008—8199(2oo8)12—1338—03 基质金属蛋 白酶 (matrixmetalloproteinases， 技有限公司)中的说明书进行操作，使用 eppendoff MMP)介 导 的细胞 外 基 质 (extracel|ularmatrix， 核酸蛋白检测仪检测总RNA浓度和纯度，取A枷缁。 ECM)及基膜的降解，是肺癌细胞侵袭和转移的必 在 1．8～2．0之间的标本进行逆转录，并保存于 要步骤 。MMP一10是MMP家族 中的重要成员之一， 一 80％冰箱。 本文作者 旨在使用 Real—timePCR法研究 MMP一10 1．2．2 逆转录 每一组织的总 RNA均取 2txg进 mRNA在非小细胞肺癌 (non—smallcelllungcancer， 行逆转录。根据 cDNA首链合成试剂盒 (立陶宛 NSCLC)组织及其癌旁正常组织中的表达及其与性 Fermentas公司，购 自晶美生物技术有限公司)中的 别、年龄、分期、分级、肿瘤大小、淋巴结转移及病理 使用说明书操作，在定性 PCR仪中进行反应，逆转 类型之间的关系。 录好的cDNA均保存于 一30℃冰箱。 1．2．3 引物及探针的设计和合成 使用 Primer 1 资料和方法 Primier5．0软件，分别根据基因序列 NM—D02425， 1．1 标本来源 收集2005年 10月至2006年 3月 M10098设计 MMP．10和 18SrRNA 的引物和探针 间我院心胸外科手术切除的32例肺癌患者的肺癌 (见表 1)，均 由上海生工生物工程有限公司合成。 组织及远离癌组织3～5cm的正常组织各 32份，液 氮保存。所有患者术前均未行任何治疗，采取标本 表 1 MMP一10、18SrRNA引物及探针序列表 均得到患者的同意，术后病理证实为NSCLC，其中 基因 序列(543) 男24例，女8例，年龄 37～81岁，中位年龄6l岁。 MMP．10 腺癌 l6例，鳞癌 16例。无淋 巴结转移 l8例，有淋 正义链引物 TGTACCCACTC．rACAACTCATTCACA 巴结转移 14例。TNM分期：I期 18例，Ⅱ期4例， 反义链引物 TGAATGCCATYCACATCATCITrG Ⅲ期 l0例。 探针 FAM．AGCTCGCCCAGTTCCGCC兀 C．TAMRA 18SrRNA 1．2 方法 正义链引物 CGTTCAGCCACCCGAGATT 1．2．1 组织总RNA提取 从液氮中取