磷酸甘露糖异构酶基因快速初筛方法的建立.pdfVIP

2011年 8月 食品研究与开发 第32卷第8期 FoodResearchAndDevelopment 检测分析 -=== 100 ． ． ． ．． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ．． ． ． ． ． ． ． ． — — 磷酸甘露糖异构酶基因快速初筛方法的建立 贺艳 ，郑文杰 ，张裕君 ，孟甜 ，牛嘉慧z，柏松一，刘跃庭 (1．天津出人境检验检疫局 ，天津 300201；2．新疆阿拉山口fn人境检验检疫局， 新疆 博乐 833418) 摘 要：建立磷酸甘露糖异构酶 (PMI)基因环介导等温扩增快速检测方法。设计了两对内引物和两对外引物。 优化后 的反应条件为：FIP，BIP浓度为O．8 m。UI，F3，B3浓度为0．2 m。1／L，镁离子浓度为2 ． 0mm。1L／，甜菜碱浓度为1．6mmoI／L． 反应时间为40min，反 应温度 为62．0oC。SYBRGreen法检 测需2h，电泳法检 测共需2 ． 5h。与实时荧光和普通PCR比较特 异性 良好，转基 因成分检测限达到O．01％。结果表明该检测方法简单且快速。 关键词 ：LAMP；PMI；转基 因：检测 DevelopmentofRapidScreenMethodofPhosphomannoseIsomerase HEYan，ZHENGWen-jie’，ZHANGYu-jun，MENGTian，NIUJia—hui，BAISong，LIUYue—ting (1．TianjinEntry—ExitInspectionandQuantityBureau，Tianjin300201．China；2．XinjiangALashankouEntry—Exit InspectionandQuantityBureau，Bole833418，Xinjiang，China) Abstract：A loopmediatedisothermalamplification (LAMP)assaywasdevelopedfortherapiddetectionof genePMI．A setofsepcificprimers，twoinnerprimersandouterprimersweredesigned．Theconcentrations：FIP andBIP，both0．8Ixmol／L，F3andB3，both0．2 Ixmol／L．Mg ，2mlllol／L，Betaine，1．6mmo1]L．Thereactiontime andtemperatureswereoptimizedfor40rainat62．0oc．SYBR GreenIdetectionmethodcanbefinishedin2h． Electrophoresisdetectionmethodcallbefinishedin2．5h．The[+AMPassayhasahigherspecificitycompared withRealTimePCR andeonventiona1PCR．Thedetection limitofGM elementsreaches0．01％ ．Theresults indicatedthesuitabilityandsimplicityofthetestasarapidmethodofrPMIspecificdetection． Keywords：Loop-mediatedIsothermalAmplification；PhosphomannoseIsomerase；geneticallymodified； detection 植物遗传转化的转化频率通常较低 ，筛选时必须