诱导提取的dsRNA粗提液对黄瓜绿斑驳花叶病毒的抑制作用.pdfVIP

福建农林大学学报(自然科学版) 第40卷 第4期 JournalofFujianA#cultureandForestryUniversity(NaturalScienceEdition) 2011年7月 诱导提取的dsRNA粗提液对黄瓜 绿斑驳花叶病毒的抑制作用 郑海刚，陈启建 (福建农林大学植物病毒研究所，福建福州350002) 摘要：在已测序的黄瓜绿斑驳花叶病毒运动蛋白基因序列的基础上，设计特异引物，扩增全长基因，将其插入到原核表达载 体I444o的2个1r7启动子之间，构建能诱导形成双链 RNA(dsRNA)的原核表达载体L4440一MP，并转化大肠杆菌HTll5 (DE3)，经IPTG诱导，提取了高质量的dsRNA．将提取的dsRNA对黄瓜进行抗病性鉴定，ELISA检测结果表明，提取的d8R． NA能有效地抑制黄瓜绿斑驳花叶病毒的侵染，抗病率达到40％左右． 关键词：黄瓜绿斑驳花叶病毒；RNA沉默；双链RNA 中圈分类号：S432．1 文献标识码：A 文章编号：1671~470(2011)o4-0346-o5 InhibitionofcrudeextractsofextracteddsI byinduction onthecucumbergreenmottlemosaicvirus ZHENGHai-gang，CHENQidian (InstituteofPlnatVirology，Fujina AgricultureandForestryUniversiyt，Fuzhou，Fujina350002，China) Abstract：Themovementprotein(MP)8eneofcucumbergreenmoralemosaicvirusWa8clonedusingspecificprimersdesignedac· cordingtothesequenced8ene．ThenthePCRproductswereinsertde intohtevectorI444o。whichcontainsI7promotersitesflanking eachsideofthemultiplecloningsite(MCS)nadcanhtusproducedsRNAs．TheresultdeplasmidsweretransformedintotheF~che- richiacdiHTll5(DE3)．After1PTGinduction，dsRNAsofhi．ghqualiytwereobtainde．TheeHe~s0fthedsRNAsonhtediseasere- sistenceofcucumberwerehtenevaluatde．ELISAexperimentsshowedthatabout40％0fpl叽t8appliedwihtRNAswerevinm-6ve． Keywords：cucumbergreenmottlemosaicvirus；RNA sliencing；dsRNA 植物病毒病有植物 “癌症”之称，其每年对粮食作物、园艺作物、经济作物等造成的经济损失约数百亿 元 l【】．黄瓜绿斑驳花叶病毒(cucumbergreenmottlemosaicvirus，CGMMV)是严重威胁葫芦科作物生产的 重要病毒之一．2006年 l2月中华人民共和国农业部将 CGMMV确定为我国农业植物检疫性有害生物．因 此对该病毒的防治显得尤为重要 J． 目前，防治病毒病常用的方法有：经组织脱毒后获得无病毒的繁殖材料；使用农药驱除或杀死昆虫介 体；通过基因工程培养获得转基因植株等H】．不过这些方法都有一定的局限性，如组织脱毒法成本高、工 作量大，喷洒农药会造成严重的环境污染，获得转基因植物的几率小，转化体系不成熟等．RNA沉默机制 的揭示为植物病毒的防治提供了新的思路 】．RNA干扰 (RNAinterference，RNAi)是由双链 aNA(dsR- NA)介导的、在转录后特异性地降解与之同源的mRNA，从而抑制相应基因表达的