棕点石斑鱼Piscidin样肽基因的克隆及其成熟肽的原核表达.pdfVIP

第 32卷 第 4期 渔 业 科 学 进 展 Vo1．32，NO．4 2 0 1 1 年 8月 PROGRESS1N FISHERY SCIENCES Aug．，2011 棕点石斑鱼 Piscidin样肽基因的克隆及其 成熟肽的原核表达 陈大玮 邓 利 何 凡 邱聪龄 马一见 刘志刚 (深圳大学生命科学学院，518060) (。深圳大学医学院，518060) 摘 要 以简并 引物通过 RT—PCR从 重要经 济海水鱼类棕 点石斑鱼 Epinephelus_厂“fog ＆ “ 白细胞 中扩增 出一条 388bp具有完整编码框的 cDNA序 列。Blast分析初步显示，该序列属于鱼类 抗茵肽 Piscidin家族的一 员，将其命名为棕 点石斑鱼 Piscidin样肽 (GU592793)，推 导氨基酸序列具 有界定鱼类 Piscidin的以下共 同特征 ：(1)预测的信号肽序列与其他 Piscidin的同源性较 高，在 60％ ～ 95 之 间；(2)推测的成熟肽 N端6个氨基酸残基富含Phe、lie及 His；(3)成熟肽第8个和第 13个 氨基酸位 点均为Gly。NJ进化树分析表明，该 cDNA推 导的氨基酸序列与赤点石斑鱼 Epinephelus akaarapiscidin—likepeptide(ACE78290)、斜 带石 斑 鱼 EpinepheluscoioidesPiscidin—likepeptide (ACE78291)以高达 81 的支持率聚为一支。也表 明本研 究成功克隆到棕 点石斑鱼首条 Piscidin cDNA序列。推测的成熟肽为两亲性 阳离子肽，等 电点 12．48，Schiffer—Edmunson预测其二级结构 呈 a螺旋构型。将推测的成熟肽序列亚克隆至 pET一32a构建融合表达载体 pET32a—pis(EF)，并在 大肠杆菌E．coli0rigami(DE3)中成功表达 出融合蛋白，以 1mmol／mlIPTG于30℃进行诱导表达， 4h可获得大量表达，目的蛋 白以包涵体形式存在。 关键词 抗菌肽 Piscidin 基 因克隆 原核表达 棕点石斑鱼 中图分类号 S917 文献识别码 A 文章编号 1000—7075(2O11)040126—08 Cloningofantimicrobialpiscidin—likepeptideandprokaryoticexpression oftheputativematurepeptideinEpinephelus厂 scog fnf CHEN Da—wei DENG Li HEFan QIU Cong—ling MA Yi-jian LIU Zhi—gang (CollegeofLifeSciences，ShenzhenUniversity，518060) (ShenzhenUniversity，SchoolofM edicine，518060) ABSTRACT A 388bp cDNA sequencewith completeopenreadingframewasamplifiedbyRT- PCRwithdegenerateprimersfrom leucocytesofEpinephelusfuscoguttatus，animportantcommercial marinefish species．Blastanalysispreliminarilysuggested thattheobtained sequence，which was namedasEpinephelusfuscoguttatuspiscidin—likepeptide(GU59