小鼠胎儿成纤维细胞及胚胎干细胞转绿色荧光蛋白基因的研究.pdfVIP

第42卷 第 6期 哈尔滨医科大学学报 V01．42．No．6 2008年l2月 JOURNALOFHARBINMEDICALUNIVERSITY Dec．．2008 549 基赫 究 小鼠胎儿成纤维细胞及胚胎干细胞转绿色 荧光蛋 白基因的研究 阎晓飞，徐燕宁，申景岭，单智焱，关 娜，钟淑琦，金连弘，雷 蕾 (哈尔滨医科大学组织学与胚胎学教研室，黑龙江哈尔滨150081) [摘要】 目的 检测用增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)转染的小鼠胎儿成纤维细胞及小 鼠胚胎干细胞的转染效 率及EGFP的表达情况。方法 电穿孔法将 EGFP转入胎儿成纤维细胞及胚胎干细胞，G418筛选，荧光显微镜观 察转染效率及绿色荧光蛋白表达情况。结果 胚胎干细胞的转染率高于成纤维细胞，转染后的两种细胞经药物筛 选均有绿色荧光蛋 白表达。结论 电穿孔转染细胞的方法简单、效率高，是一种较为理想的基因转染方法，经药物 筛选后的两种细胞均可用于核移植，为转基因克隆动物的研究奠定了基础。 [关键词] 电穿孔；转基因；成纤维细胞；胚胎干细胞 [中图分类号]R321 [文献标识码]A [文章编号]1000—1905(2008)06—0549—04 Studyoftransfectionofenhancedgreenfluorescentproteingeneintomouse embryonicfibroblastandembryonicstem cells YAN Xiao—fei，XU Yan—ning (DepartmentofHistologyandEmbryology，Harbin，SHENJing—ling，etal MedicalUniversity，Harbin150081，China) Abstract：Objective Toevaluatetransfectionefficiencyofmouseembryonicfibroblastandembryonic stemcellstransfectedwithenhancedgreenfluorescentproteingene(EGFP)，andtheexpressionofEGFP inthesecells．M ethods EGFPwasintroducedintomouseembryonicfibroblastandembryonicstem cells byelectroporation．Trans~ctedcellswereselectedbyG4l8resistanceandscreenedbyEGFP expression underthefluorescentmicroscope．Results Fluorescentproteinswereexpressedbothiflmouseembryonic fibroblastandembryonicstem cells．However，thetransfectionefficiencyofembryonicstem cellswassig． nificantlyhigherthanthatoffibroblast．Conclusion Formouseembryonicfibroblastandembryonicstem cells，electroporationisasimpleandefficientgenetransfectionmethod．Transfeetedcellswhichscreened bydrugresistancecanbeusedasdonorcellsfornucleartransfer． Keywords：electroporation；transgene；fibrobl