重组人B淋巴细胞刺激因子受体-抗体融合蛋白的肽图分析.pdfVIP

药物分析杂志ChinJPharmAnal2011，31(6) 一 l185一 重组人 B淋巴细胞刺激因子受体 一抗体融合蛋白的肽图分析 姚雪静，李壮林，房健民 (烟台荣昌生物工程有限公司，烟台264006) 摘要 目的：建立重组人 B淋巴细胞刺激因子受体一抗体融合蛋白(TACI—Fc)的肽图分析方法。方法：将 TACI—Fc蛋 白用 胰蛋 白酶酶解、用尿素将蛋白分子变性、用二硫苏糖醇打断二硫键、用碘乙酰胺封闭巯基、用胰蛋 白酶再次酶解等方法处理 后 ，采用高效液相色谱分析，色谱柱为VydacC (250mm×4．6mm，5txm)，流动相A液为含0．1％三氟乙酸的水溶液 ，流动相 B液为含0．1％三氟乙酸的乙腈溶液，梯度洗脱 ，流速为 1．0mL·rain～，检测波长为214rim。结果：TACI—Fc蛋白被有效酶 解 ，酶解后的各个片段能够很好的分离。结论：本法准确性高，重复性好，是重组人B淋巴细胞刺激因子受体 一抗体融合蛋白 结构确认的有效方法。 关键词：重组；淋巴细胞；刺激因子；受体；抗体 ；融合蛋白；肽图 中图分类号：R917 文献标识码：A 文章编号：0254—1793(2011)06—1185—03 Peptidemappinganalysisofrecombinanthuman B lymphocyte stimulatorreceptor：IgG Fcfusionprotein YAOXue—jing，LIZhuang—lin，FANGJian—min (YantaiRongchangBioengineeringCo．，Ltd，Yantai264006，China) Abstract Objective：ToestablishapeptidemappinganalysismethodinrecombinanthumanBlymphocytestimu— latorreceptor：IgG Fcfusionprotein．Method：TheTACI—Fcproteinwasdigestedwithtrypsinandthenwasdena— turedbyurea．Next．thedisulfidebondswereinterruptedbydithiothreitolandthethiolgroupswereclosedwithi0． doacetamide．Finally，thetreatedTACI—Fcproteinwasdigestedwith trypsin againandassayedbyHPLC．Vydac C】8(250mmx4．6mm，5txm)wasusedasanalysiscolumn，0．1％trifluoroaceticacidinwaterand0．1％ triflu· oroaceticacid inacetonitrilewereusedasmobilephaseA andmobilephaseB，respectively．Thegradientelution processwasperformed．Thedetectionwavelengthwas214nm andflow ratewas1．0mL ·min～．Results：Thefrag— mentsofTACI—Fcwerewelldigestedandseparated．Conclusion：Thismethod isaccurate，stable，andreliablefor testingofhumanBlymphocytestimulatorreceptor：IgG Fcfusionproteinpeptidemapping． Keywords：recombinant；lymphocyte；stimulator；receptor；antibody；fusionprotein；peptidemapping 重组人 B淋巴细胞刺激因子受体 一抗体融合 究通过对 TACI—Fc蛋 白的多步预处理，使其充分 蛋 白是将人 B淋 巴细胞刺激因子 (BlyS)的受体 被胰蛋 白酶酶解 ，建立 了一个有效的、稳定