电化学发光PCR 技术检测转基因植物.pdfVIP

2004 ; 31 (4) 　　 　　 　　　生物化学与生物物理进展 　　 Prog. Biochem. Biophys. 3·75 · 技术与方法 电化学发光 PCR 技术检测转基因植物 刘晋峰 　邢 　达 　沈行燕 　朱德斌 (华南师范大学激光生命科学研究所 , 广州 510631) 摘要 　随着转基因植物种类的增多 , 转基因植物的检测也成了当今的热门话题. 电化学发光法是将电化学与化 学发光两种高灵敏度方法相结合 , 实现了检测的高效、准确、无毒害. 电化学发光 PCR 法首次将电化学发光技 术、PCR 技术和双探针杂交技术结合起来 , 用于检测 CaMV (cauliflower mosaic virus) 35 S 启动子 , 从而判断其 是否含有转基因成分. PCR 产物与生物素标记的探针杂交 , 可以起到筛选的作用 ; 与三联吡啶钌标记的探针杂 交则可用于电化学发光检测. 两种探针同时与转基因样品 PCR 产物杂交 , 使结果避免假阳性的影响而更加准 确. 实验表明 : 此方法可以准确地检测到 35 S 启动子的存在. 该方法灵敏度高 , 可靠性强 , 操作简便 , 结果准 确 , 有望成为一种高效的转基因检测方法. 关键词 　电化学发光, 转基因植物 , CaMV35 S 启动子 学科分类号 　Q63 ( ( ( ) 3 + + ) 　　转基因生物体或遗传工程体 GMO genetically [ Ru bp y 3 ] 和TPA · 在电极表面迅速反应 , modified organisms) 是借助于基因工程技术将外源 三价的 [ Ru ( bp y) 3 ]3 + 被还原形成激发态的二价 基因转入生物体内 , 实现基因在生物体内表达而获 [ Ru (bp y) 3 ]2 + ·, TPA·自身被氧化成二丙胺和丙 得一种具有新的优良性状的生物体[1 ] . 目前, 世 醛. 接着激发态的 [ Ru (bp y) 3 ]2 + ·衰减成基态的 界上转基因植物已经有一百多种 , 全球转基因植物 [ Ru (bpy) 3 ]2 + , 同时发射一个波长为 614 nm 的光 田间试验数量超过 1 万例. 转基因作物在带来巨大 [7 ] 子 ( 图 1) . 这一过程在电极表面周而复始地进 效益的同时也有许多潜在问题 , 转基因作物的安全 行 , 产生许多光子 , 使光信号得以增强 , 从而使检 [2 ] 性在全球范围内引起了激烈的争论与普遍关注 . 测灵敏度大大提高[4 ] . 与其他几种标记技术相比 , 关于 GMO 检测方法目前主要是 EL ISA 法和 PCR 法 , 但都存在着一些不足之处. EL ISA 法检测 GMO 时 , 因蛋白质容易热变性 , 所以很难检测转 基因原料加工的食品 , 另外 , EL ISA 法的灵敏度 较低 , 而且耗力耗时 ; 普通