传代培养对供核细胞胰岛素样生长因子Ⅱ基因表达的影响.pdfVIP

2008年12月第46卷第36期 ·论 著 · 传代培养对供核细胞胰岛素样生长因子Ⅱ基因表达的影响术 杨晓煜 1,2黄燕芳 ， (1．福建医科大学细胞与发育工程研究中心；2．福建省生殖医学(工程)中心； 3．福建医科大学附属第一医院，福州350004) 摘【要]目的 通过建立一种简便可靠的胰岛素样生长因子Ⅱ(IGF2)基因实时荧光定量PCR检测方法来探讨传代培养对供 核细胞中IGF2基因表达的影响。方法 通过实时荧光PCR，选择合适的 “相对标准品”绘制相对标准曲线，检测来源于鼠耳 的成纤维样细胞 IGF2的表达 。结果 通过实时PCR的相对定量检测出在鼠耳成纤维样细胞的传代培养中，随着培养代 数的增加，IGF2的表达减弱。结论 双标准曲线的实时荧光 PCR相对定量法用于检测 IGF2的表达是可行的；培养代数影响 IGF2基因的表达，为体细胞克隆研究中供核细胞的选择及后续的基因印迹研究奠定基础。 [关键词】IGF2；基因表达；成纤维样细胞 【中图分类号】R34 文【献标识码】A 文【章编号】1673—9701(2008)36—01—04 EffectofSerialSubcultivation on the Expression ofInsulin-like Growth FactorlIinDonorCells YANG Xiaoyu HUANG y_anfan 1．CenterofCellandDevelopmentalBiology；2．FujianReproductiveMedicineCenter；3．TheAffiliatedFirstHospital，FujianMedicalUni— versity，Fuzhou 350004 A【bstract】ObjectiveToestablishareliablemethodofreal-timePCR todetecthteexpressionofimprintedgeneIGF2inserial subculfivated fibroblast-like ceHsfrom mouse ear．MethodsEstablishing the met}lod ofreal-timePCR byselectingthe suitable “rela— tive standard preparation”and drawingtlle relative satndard curve．which iSused to detectexpressive levelofIGF2 in serialsubcuhi— vated fibroblast—like ceils．ResultsBy hte estba lishmentoftlle metIlod ofreal—time PCR．we detectthatthe expressivelevelofIG172 decreasesin theprocessofserialsubcuhivation．Conclusion ItiSfeasible to detecthte expression ofIGF2 bv the method ofre— al—timePCR ofdouble satndrad curve．Serial subcuhivation effecthte expressivelevelofIGF2 in fibroblast—likeceilsfrom mouseera． which providebasesforselection ofdonorcellna d1aterstudyon imprintingin somaticcellnucleartransfer． IKeyWords】IGF2；Geneexpression；Fibroblast 胰岛素样生长因子 lI(Insulin—likegrowht factor2，IGF2)基 有效方向之一。成纤维样细胞(Fibroblast—likecells)是常见的供核 因，是最早发现的内源性印迹基因，正常情况下主要表现为母源 细胞 ，已有相应的克