农药残留检测用植物酯酶源的筛选.pdfVIP

江苏农业科学 2011年第39卷第4期 王亚飞，张金艳．农药残留检测用植物酯酶源 的筛选[J]．江苏农业科学，2011，39(4)：375—376 农药残 留检测用植物酯酶源的筛选 王亚飞 ，张金艳 (黑龙江八 …农垦大学文理学 院，黑龙江大庆 163319) 摘要 ：利用酶抑制原理 ，对活性可被有机磷农药抑制的不 同来源 的植物酯酶进行筛选 ，以总酯酶活力 、比活力及 对有机磷农药的灵敏度为筛选指标 ，最终确定供试植物 中苜蓿为农药残 留检测用最佳植物酯酶源 。 关键词：农药残留检测；植物酯酶源；筛选 中图分类号：$481 ．8 文献标志码 ：A 文章编号：1002—1302(2011)04—0375—02 传统的农药残留检测技术如气相色谱法 、液相色谱 7．5、8．0、9．0的磷酸盐、醋酸盐和氯化铵缓冲溶液。 法 、色谱 一质谱联用法 、免疫亲和色谱法 “、凝胶渗 1．4．2 植物酯酶粗酶液的制备 分别取三叶草、苜蓿、锦鸡 透色谱法…。、光谱法 等虽然检测灵敏度高、准确度好 ，可 儿、羊草、狗尾草、小叶章等新鲜牧草 的嫩 叶5g，在4℃下研 以定性和定量地检测农药的种类和含量，但使用这些检测方 磨至匀浆，按料液比1g：10mL加入 pH值 7．0的0．1mol／L 法样本预处理繁琐 、费时，且需消耗大量的有毒溶剂，从而对 磷酸盐缓冲溶液 ，移入锥形瓶 中振荡 10nlin，4层纱布过滤 ， 环境造成污染 ，对工作人员的身体健康造成伤害。此外，检测 滤液以4000～6000r／min的速度低温离心 15min，取上清 过程需要昂贵的仪器和专业的分析人员 ，检测成本高、时问 液，即得植物酯酶粗酶液，将粗酶液保存在 4℃冰箱中备用。 长，所 以这些检测 段只适用于实验室检测 。农药残留快 分别称取粉碎后的大豆、大米、小米、玉米、薏米 、燕麦及面粉 速检测方法以其操作简单 、方法灵敏、检测快速等优点被广泛 各 5g，按料液 比1g：10mL加入 pH值 7．0的0．1mol／L磷 使用，其中的植物酯酶抑制法 以其酶源原料来源广、成本低 酸盐缓冲溶液 ，置于4℃冰箱中过夜，4层纱布过滤，滤液以 廉、保存期长、适合现场检测等优点备受关注 14]。目前 ，植物 4000～6000r／min的速度低温离心 15min，取上清液 ，即得 酯酶都是以粮食作物如小麦 ”、大豆 、荞麦、豌豆、玉米 植物酯酶粗酶液 ，将粗酶液保存在4℃冰箱 中备用。 等为酶源，检测成本虽然比动物酶源低 ，但毕竟需要消耗粮 1．4．3 总酯酶活力的测定 取 3．5mL粗酶液 1倍稀释液于 食。本试验拟从来源更广、价格更加低廉的牧草中寻找与筛 锥形瓶 中，加入0．5mL提取剂 ，在 40 巾恒温水浴 10min， 选适合于农药残 留检测用 的植物酯酶源 。 加入 0．5mL2，6一二氯乙酰靛酚显色剂，在4O℃水浴中继续 恒温 20rain，在 605nm波长下测定吸光度 (D)值。空 白试剂 1 材料与方法 为参 比液 。以反应液 D值的平均变化 AD表示酶活 。 1．1 供试材料 1．4．4 蛋 白质含量的测定 以牛血清蛋 白为标准蛋 白，配制 大豆 、大米、小米、玉米、薏米、燕麦、面粉，均购 自大庆庆 成5mg／mL的标准蛋 白溶液。取 l2支试 管，分别加入 0、 客降超市；三叶草、苜蓿 、锦鸡儿、羊草、狗尾草、小叶章，采 自 0．2、0．4、0．6、0．8、1．0mL的标准蛋 白溶液 ，用蒸馏水补足到 八一农垦大学试验 田。 1mL，加入4m